Geelfiltratsiooni ja afiinsuskromatograafia peamine erinevus seisneb selles, et geelfiltratsioonikromatograafia sõltub analüüdi proovi molekulmassi või suuruse erinevustest, samas kui afiinsuskromatograafia sõltub analüüdi afiinsusest immobiliseeritud ligandi suhtes.
Mõiste kromatograafia analüütilises keemias viitab erinevate tehnikate abil segus olevate komponentide eraldamise protsessile. Kromatograafia on koondnimetus, mis tähistab mitut erinevat eraldamismeetodit.
Mis on geelfiltratsioonikromatograafia?
Geelfiltratsioonkromatograafia on analüütiline meetod, mille puhul komponentide eraldamine sõltub molekulmassi või suuruse erinevusest. Seda tehnikat tuntakse ka kui suuruseralduskromatograafiat või molekulaarsõelkromatograafiat. Selle protsessi eraldustehnika sõltub proovis olevate molekulide erinevast võimest siseneda geelfiltratsioonikeskkonna pooridesse.
Geelfiltreerimise tehnikas sisaldab statsionaarne faas hüdraatunud käsnataolise materjali terakesi, millel on kitsas suurusvahemikus molekulaarsete mõõtmetega poorid. Kui laseme erineva suurusega molekulidest koosneva vesilahuse läbi kolonni, mis sisaldab neid "molekulaarsõelu", liiguvad filtrimiskeskkonna pooridest suuremad molekulid kiiresti läbi kolonni. Seevastu väiksemad molekulid sisenevad geeli pooridesse ja kipuvad aeglaselt läbi kolonni liikuma. Molekulid elueeruvad kolonnist molekuli suuruse vähenemise järjekorras. Siin on geeli välistamispiir väikseimate molekulide molekulmass, mis ei suuda antud geeli pooridesse tungida.
Geelfiltratsiooni tehnikaid on erinevat tüüpi, näiteks kaudne geelfiltratsiooni meetod, püsifaasi geelfiltreerimine, geelgraanulite dialüüs jne. Kaudne geelfiltratsioonikromatograafia on kasulik vabade kilpnäärmehormoonide määramisel. Stabiilse oleku geelfiltratsioonikromatograafia on kaudne meetod, mis on kasulik peamiselt vabade steroidide (nt kortisool, testosteroon jne) mõõtmiseks. Geelgraanulitega dialüüs on seevastu stabiilse oleku geelfiltratsiooni modifikatsioon, mis on suhteliselt lihtsam.
Mis on afiinsuskromatograafia?
Afiinsuskromatograafia on analüütiline meetod ja eraldusmeetod, mis sõltub spetsiifilisest sidumisinteraktsioonist immobiliseeritud ligandi ja selle sidumispartneri vahel. Mõned näited hõlmavad antikeha-antigeeni sidumist, ensüüm-substraadi sidumist ja ensüümi-inhibiitori sidumist. Seetõttu on sellel tehnikal palju olulisi rakendusi nukleiinhapete puhastamisel, valkude puhastamisel rakuekstraktidest ja verest puhastamisel.
Selle tehnika puhul on kõige olulisem omadus ligandi immobiliseerimine. Selleks saame kasutada erinevaid materjale nagu akrülaadid ja silikageeli. Oluline on vältida sihtmolekuli steerilist sekkumist ligandile. Lisaks on tahke faasi külge kinnitatud inhibiitor. Me nimetame seda inhibiitorit vahetükiks. Klassikaliselt koosneb vahetükk süsivesinikahelast.
Afiinsuskromatograafia statsionaarne faas sisaldab südamikku, speisserit ja ligandit. Mõnikord on sellel ka ligandiga seotud metalliioon. Statsionaarse faasi eelistatuim tahke faas selles tehnikas on agaroosgeel, kuna seda on lihtne väljastada, et täita ja pakkida kolonn mis tahes suurusega vaigukihtidega ning see on piisav alt suur, et biomolekulid saaksid vab alt voolata helmestesse ja läbi. Ligandid võivad helmeste polümeeriga kovalentselt kinnituda mitmel viisil. Levinumad speisserühendid on tsüaanbromiid, epoksiid, C6-happega epoksiid ja diamiin. Teisest küljest erineb ligand, mida saame kasutada, olenev alt sihtmärgist, nt antikeha-antigeen, raua- või alumiiniumioonid-fosfoproteiinid, avidiin-biotiin, glutatioon-GST, kelaator-His-märgistatud valgud jne.
Mis vahe on geelfiltrimisel ja afiinsuskromatograafial?
Kromatograafia on oluline analüütiline tehnika. Geelfiltratsioonkromatograafia ja afiinsuskromatograafia on kaks olulist kromatograafia variatsiooni. Peamine erinevus geelfiltratsiooni ja afiinsuskromatograafia vahel on see, et geelfiltratsioonikromatograafia sõltub analüüdi proovi molekulmassi või suuruse erinevustest, samas kui afiinsuskromatograafia sõltub analüüdi afiinsusest immobiliseeritud ligandi suhtes.
Kokkuvõte – geelfiltreerimine vs afiinsuskromatograafia
Sõltuv alt nende rakendusest ja analüüdi proovi olemusest on erinevat tüüpi kromatograafilisi tehnikaid. Geelfiltreerimine ja afiinsuskromatograafia on kaks sellist tehnikat. Peamine erinevus geelfiltratsiooni ja afiinsuskromatograafia vahel on see, et geelfiltratsioonikromatograafia sõltub analüüdi proovi molekulmassi või suuruse erinevustest, samas kui afiinsuskromatograafia sõltub analüüdi afiinsusest immobiliseeritud ligandi suhtes.
