Põhiline erinevus DNA ja RNA eraldamise vahel seisneb selles, et DNA eraldamine on protseduur, mille käigus eraldatakse bioloogilisest rakust teatud tüüpi nukleiinhape, mida nimetatakse DNA-ks, samas kui RNA eraldamine on protseduur, mille käigus eraldatakse teatud tüüpi nukleiinhape, mida nimetatakse RNA-ks. ekstraheeritud bioloogilisest rakust.
Nukleiinhapete isoleerimine on paljude järgnevate rakenduste lähtepunkt. Nukleiinhapete kõrge kvaliteet lähteproovides on järgnevate allavoolu rakenduste edu võtmetegur. Nukleiinhappe eraldamist võib defineerida kui etappide seeriat nukleiinhappe saamiseks puhtusega proovis, mida saab kasutada erinevates allavoolu etappides. Nukleiinhapete ekstraheerimise eesmärk on lõhustada rakumembraan ning saavutada lipiidide ja valkude maksimaalne eliminatsioon, et saada puhtaid nukleiinhappeid, nagu DNA või RNA.
Mis on DNA isoleerimine?
DNA eraldamine on rutiinne protseduur, mille käigus ekstraheeritakse bioloogilisest rakust teatud tüüpi nukleiinhapet, mida nimetatakse DNA-ks. DNA eraldamine viiakse läbi DNA ekstraheerimisega verest, külmutatud koeproovidest ja parafiini koeplokkidest. DNA eraldamisel on kolm peamist etappi, sealhulgas rakkude lüüs, DNA ekstraheerimine ja sadestamine. Rakkude lüüsimisel eraldatakse proovis olevad rakud üksteisest sageli füüsikaliste vahenditega, nagu jahvatamine või keerisega segamine, ja pannakse soola sisaldavasse lahusesse. Tavaliselt aitavad soolas sisalduvad positiivselt laetud naatriumioonid kaitsta negatiivselt laetud fosfaatrühmi, mis kulgevad mööda DNA selgroogu. Hiljem lisatakse detergenti, et lõhustada rakumembraanis ja tuumades olevaid lipiide, mis vabastavad DNA nende membraanide katkemisel.
Joonis 01: DNA eraldamine
DNA ekstraheerimine tehakse puhta DNA proovi saamiseks. Sageli lisatakse proteaasi ensüümi, et lagundada DNA-ga seotud valke ja teisi raku valke. Peale selle saab osa rakujäätmetest eemaldada proovi filtreerimise teel. Lõpuks sadestatakse DNA alkoholi abil. Veelgi enam, kui DNA-d on palju, võib protseduuri lõpus täheldada ihne valget sadet.
Mis on RNA isoleerimine?
RNA eraldamine on protseduur, mille käigus ekstraheeritakse bioloogilisest rakust teatud tüüpi nukleiinhapet, mida nimetatakse RNA-ks. Seda protseduuri raskendab sageli RNA-d lagundavate rakkude ja kudede ribonukleaasi ensüümide olemasolu. Molekulaarbioloogias kasutatakse proovidest RNA eraldamiseks mitmeid meetodeid, näiteks guanidiinium-tiotsüanaadi-fenooli-kloroformi ekstraheerimine.
Joonis 02: RNA eraldamine
RNA eraldamine koosneb tavaliselt mitmest etapist, sealhulgas rakkude lüüsist ja homogeniseerimisest, biokeemiliste protsesside kustutamisest, nukleiinhapete jaotusest, RNA otsimisest, toorpuhastusest ja RNA kvaliteedi hindamisest. Filterpaberil põhineval lüüsi- ja elueerimismeetodil on RNA ekstraheerimisel suur läbilaskevõime. Lisaks on RNA ekstraheerimine vedelas lämmastikus uhmri ja nuia abil samuti väga kasulik meetod, kuna see takistab ribonukleaasi aktiivsust.
Millised on DNA ja RNA eraldamise sarnasused?
- DNA ja RNA eraldamine on kahte tüüpi nukleiinhapete eraldamise protseduure.
- Mõlemal protseduuril on sarnased põhietapid, nagu rakkude lüüs, ekstraheerimine ja puhastamine.
- Need protseduurid eraldavad olulised nukleiinhappetüübid, millel on mitmeid allavoolu rakendusi.
- Need viiakse läbi laboratoorsetes seadistustes.
- Neid saab teha valmistatud komplektidega.
Mis vahe on DNA ja RNA isoleerimisel?
DNA eraldamisel ekstraheeritakse bioloogilisest rakust teatud tüüpi nukleiinhape, mida nimetatakse DNA-ks, samas kui RNA eraldamisel ekstraheeritakse bioloogilisest rakust teatud tüüpi nukleiinhapet, mida nimetatakse RNA-ks. Seega on see peamine erinevus DNA ja RNA isoleerimise vahel. Lisaks viiakse DNA eraldamine tavaliselt läbi umbes pH 7 kuni 8 juures, samas kui RNA isoleerimine toimub tavaliselt umbes pH 4,5 juures.
Allpool olev infograafik esitab erinevused DNA ja RNA isoleerimise vahel tabelina kõrvuti võrdlemiseks.
Kokkuvõte – DNA vs RNA isoleerimine
DNA ja RNA eraldamine on kahte tüüpi nukleiinhapete eraldamise protseduure. DNA eraldamine on protseduur, mille käigus DNA ekstraheeritakse bioloogilisest rakust. RNA eraldamine on protseduur, mille käigus ekstraheeritakse RNA bioloogilisest rakust. Niisiis, see on peamine erinevus DNA ja RNA eraldamise vahel.
