Peamine erinevus – voolutsütomeetria vs FACS
Rakuteooria kontekstis on rakud kõigi elusorganismide põhiline struktuurne ja funktsionaalne üksus. Rakkude sorteerimine on metoodika, mida kasutatakse erinevate rakkude eraldamiseks vastav alt füsioloogilistele ja morfoloogilistele tunnustele. Need võivad olla rakusiseste või ekstratsellulaarsete omadustega. DNA, RNA ja valkude koostoimet peetakse rakusiseseks interaktiivseks omaduseks, samas kui kuju, suurust ja erinevaid pinnavalke peetakse rakuvälisteks omadusteks. Tänapäeva teaduses on rakkude sorteerimise metoodikad aidanud kaasa erinevatele bioloogiliste uuringute uurimisele ja ka uute põhimõtete kehtestamisele meditsiiniuuringute kaudu. Rakkude sorteerimine toimub erinevatel meetoditel, mis hõlmavad nii algelist väiksema varustusega meetodit kui ka arenenud tehnoloogilisi meetodeid keerukate masinate kasutamisega. Peamised kasutatavad meetodid on voolutsütomeetria, fluorestseeruv aktiveeritud rakkude sorteerimine (FACS), magnetiline rakkude valik ja üksikute rakkude sorteerimine. Voolutsütomeetria ja FACS on välja töötatud rakkude eristamiseks nende optiliste omaduste järgi. FACS on spetsiaalne voolutsütomeetria tüüp. Voolutsütomeetria on metoodika, mida kasutatakse heterogeense rakupopulatsiooni analüüsimisel vastav alt erinevatele rakupinna molekulidele, suurusele ja mahule, mis võimaldab uurida üksikuid rakke. FACS on protsess, mille käigus rakkude proovisegu sorteeritakse nende valguse hajumise ja fluorestsentsi omaduste järgi kahte või enamasse mahutisse. See on peamine erinevus voolutsütomeetria ja FACS-i vahel.
Mis on voolutsütomeetria?
Vooltsütomeetria on meetod, mida kasutatakse rakusiseste molekulide ja rakupinna ekspressiooni uurimiseks ja määramiseks ning erinevate rakutüüpide määratlemiseks ja iseloomustamiseks. Seda kasutatakse ka raku mahu ja suuruse määramiseks ning eraldatud alampopulatsioonide puhtuse hindamiseks. See võimaldab hinnata üksikuid lahtreid ligikaudu samal ajal mitme parameetriga. Voolutsütomeetriat kasutatakse fluorestsentsmärgistatud antikehade tõttu tekkiva fluorestsentsi intensiivsuse mõõtmiseks, mis aitavad tuvastada seotud rakkudega seonduvaid valke või ligande.
Joonis 01: voolutsütomeetria
Üldiselt hõlmab voolutsütomeetria peamiselt kolme alamsüsteemi. Need on vedelikud, elektroonika ja optika. Voolutsütomeetrias on saadaval viis põhikomponenti, mida kasutatakse rakkude sortimisel. Need on vooluelement (vedeliku vool, mida kasutatakse nende transportimiseks ja elementide joondamiseks optilise tuvastusprotsessi jaoks), mõõtesüsteem (võib olla erinevatest süsteemidest, sealhulgas elavhõbe- ja ksenoonlambid, suure võimsusega vesijahutusega või väikese võimsusega õhkjahutusega laserid või dioodlaserid), ADC; Analog to Digital Converter süsteem, võimendussüsteem ja arvuti analüüsiks. Omandamine on protsess, mille käigus kogutakse proovidest andmeid voolutsütomeetri abil. Seda protsessi vahendab arvuti, mis on ühendatud voolutsütomeetriga. Arvutis olev tarkvara analüüsib voolutsütomeetrist arvutisse edastatud teavet. Tarkvaral on ka võimalus reguleerida voolutsütomeetrit kontrolliva katse parameetreid.
Mis on FACS?
Vooltsütomeetria kontekstis on fluorestsentsaktiveeritud rakkude sortimine (FACS) meetod, mida kasutatakse bioloogiliste rakkude segu proovide eristamiseks ja sorteerimiseks. Rakud eraldatakse kahest või enamast mahutist. Sorteerimismeetod põhineb raku füüsikalistel omadustel, mis hõlmavad raku valguse hajumist ja fluorestsentsi omadusi. See on oluline teaduslik tehnika, mida saab kasutada igast rakust väljastatud fluorestsentssignaalide usaldusväärsete kvantitatiivsete ja kvalitatiivsete tulemuste saamiseks. FACS-i ajal algselt eelnev alt saadud rakkude segu; suspensioon suunatakse kiiresti voolava kitsa vedelikujoa keskele. Vedeliku vool on kavandatud suspensioonis olevate rakkude eraldamiseks iga raku läbimõõdu alusel. Suspensioonivoolule rakendatakse vibratsioonimehhanismi, mille tulemusena moodustuvad üksikud tilgad.
Joonis 02: FACS
Süsteem on kalibreeritud, et luua üks tilk ühe lahtriga. Vahetult enne tilkade moodustumist liigub voolususpensioon mööda fluorestsentsi mõõteseadet, mis tuvastab igale rakule iseloomuliku fluorestsentsi. Piiskade moodustumise kohta asetatakse elektriline laadimisrõngas, mille laeng indutseeritakse enne fluorestsentsi intensiivsuse mõõtmist. Kui tilgad on suspensioonivoolust moodustunud, jääb tilkadesse lõksu laeng, mis seejärel siseneb elektrostaatilise läbipaindesüsteemi. Laengu järgi suunab süsteem tilgad erinevatesse anumatesse. Laengu rakendamisviis varieerub olenev alt erinevatest FACS-is kasutatavatest süsteemidest. FACS-is kasutatavaid seadmeid tuntakse fluorestsentsaktiveeritud rakusorteerijana.
Milline on voolutsütomeetria ja FACS-i sarnasus?
Vooltsütomeetria ja FACS on välja töötatud rakkude eristamiseks nende optiliste omaduste järgi
Mis vahe on voolutsütomeetrial ja FACS-il?
Voolutsütomeetria vs FACS |
|
| Vooltsütomeetria on metoodika, mida kasutatakse heterogeense rakupopulatsiooni analüüsimisel vastav alt erinevatele rakupinna molekulidele, suurusele ja mahule, mis võimaldab uurida üksikuid rakke. | FACS on protsess, mille käigus rakkude proovisegu sorteeritakse nende valguse hajumise ja fluorestsentsi omaduste järgi kahte või enamasse mahutisse. |
Kokkuvõte – voolutsütomeetria vs FACS
Rakk on kõigi elusorganismide põhiline struktuurne ja funktsionaalne üksus. Rakkude sorteerimine on protsess, mille käigus rakud eraldatakse ja eristatakse erinevatesse kategooriatesse nende rakusiseste ja rakuväliste omaduste alusel. Voolutsütomeetria ja FACS on kaks olulist metoodikat rakkude sortimisel. Mõlemad protsessid on välja töötatud rakkude eristamiseks nende optiliste omaduste järgi. Voolutsütomeetria on metoodika, mida kasutatakse heterogeense rakupopulatsiooni analüüsimisel vastav alt erinevatele rakupinna molekulidele, suurusele ja mahule, mis võimaldab uurida üksikuid rakke. FACS on protsess, mille käigus rakkude proovisegu sorteeritakse nende valguse hajumise ja fluorestsentsi omaduste järgi kahte või enamasse mahutisse. See on erinevus voolutsütomeetria ja FACSi vahel.
Laadige alla voolutsütomeetria vs FACS PDF-versioon
Saate alla laadida selle artikli PDF-versiooni ja kasutada seda võrguühenduseta kasutamiseks vastav alt tsitaadi märkusele. Laadige PDF-versioon alla siit. Voolutsütomeetria ja FACS-i erinevus
