Põhiline erinevus FPLC ja HPLC puhul seisneb selles, et FPLC on teatud tüüpi vedelikkromatograafia, mis puhastab suuri biomolekule, nagu valgud, nukleotiidid ja peptiidid, samas kui HPLC on teatud tüüpi vedelikkromatograafia, mis eraldab väikese molekulmassiga ühendeid.
Vedelikkromatograafia on meetod, mida kasutatakse proovi eraldamiseks selle üksikuteks komponentideks. See eraldamine toimub konkreetsete proovide koostoime tõttu liikuvate ja statsionaarsete faasidega. Proovis olevad komponendid eraldatakse iga komponendi afiinsuse alusel liikuva faasi suhtes vedelikkromatograafias. Kui liikuv faas ja proov läbivad kolonni, hakkavad proovi komponendid eralduma ribadeks, mida saab tuvastada UV-VIS spektroskoopia abil. Seetõttu on FPLC ja HPLC kahte tüüpi vedelikkromatograafia tehnikaid.
Mis on FPLC?
FPLC on teatud tüüpi vedelikkromatograafia, mis puhastab suuri biomolekule, nagu valgud, nukleotiidid ja peptiidid. Kiirvalguvedelikkromatograafia (FPLC) töötas esmakordselt välja ja turustas Rootsis Pharmacia ettevõte 1982. aastal. Seda kasutatakse sageli valgu segude analüüsimiseks või puhastamiseks. See toimub proovikomponentide afiinsuse põhimõttel liikuva vedeliku (liikuv faas) ja poorse tahke materjali (statsionaarne faas) suhtes. FPLC-s on liikuv faas puhver ja statsionaarne faas helmestest koosnev vaik. Tavaliselt koosneb see ristseotud agaroosist, mis on pakitud silindrilisse klaas- või plastkolonni.
Joonis 01: FLPC (Fast Protein Liquid Chromatography) aparaat
Enamikus FLPC strateegias kasutatakse ioonivahetusvaiku. Seetõttu seondub huvipakkuv valk vaiguga laengu interaktsiooni kaudu. FLPC tehnikas kasutatakse ka kahte puhvrit: puhver 1 (tööpuhver) ja puhver 2 (elueerimispuhver). Kui puhver ja proovi segu jooksevad läbi kolonni, seostub segus olev huvipakkuv valk vaiguga laengu interaktsiooni teel. Kuid huvipakkuv valk dissotsieerub ja naaseb elueerimispuhvris olevasse lahusesse, kui elueerimispuhver protsessi lõpus läbi kolonni jookseb. Hiljem läbib lahus (eluant, mis sisaldab huvipakkuvat valku) läbi kahe detektori, mis mõõdavad soola kontsentratsiooni ja valgu kontsentratsiooni. Kuna iga valk elueerub, ilmub see tuvastamise ajal "piikina" ja seda saab koguda edasiseks kasutamiseks.
Mis on HPLC?
HPLC on teatud tüüpi vedelikkromatograafia, mis eraldab väikese molekulmassiga ühendeid. 1969. aastal valmistas esimese HPLC kaubanduslikult Waters Corporation, USA. Kõrgfektiivses vedelikkromatograafias (HPLC) pumbatakse lahustis (liikuv faas) olev proovisegu (analüüt) kõrge rõhu all läbi kolonni kromatograafilise täitematerjaliga (statsionaarne faas). Proovisegu kannab liikuv heeliumi või lämmastiku kandegaasi vool.
Joonis 02: HPLC (kõrge jõudlusega vedelikkromatograafia)
Proovisegu komponendid, millel on kõige vähem interaktsiooni statsionaarse faasiga või kõige rohkem koostoimeid liikuva faasiga, väljuvad kolonnist kiiremini. Teisest küljest väljuvad kolonnist aeglasem alt need proovisegu komponendid, millel on kõige suurem interaktsioon statsionaarse faasiga või kõige vähem interaktsiooni liikuva faasiga. Ül altoodud interaktsiooni põhimõttest lähtudes saab proovisegu komponente eraldada. Lisaks tuvastab instrumendidetektor iga kolonnist väljuva proovisegu komponendi. HPLC-d kasutatakse keskkonna- ja bioloogiliste proovide kontrollimiseks teadaolevate ühendite (nt ravimid, toksiinid või pestitsiidid) olemasolu või puudumise suhtes. Seda kasutatakse erinevates tööstusharudes, näiteks farmaatsia-, keskkonna-, kohtuekspertiisi ja kemikaalide puhul.
Millised on FPLC ja HPLC sarnasused?
- FPLC ja HPLC on vedelikkromatograafia tüübid.
- Mõlemat kasutatakse bioloogiliste proovide eraldamiseks ja tuvastamiseks.
- Neil on vedel liikuv faas ja tahke statsionaarne faas.
- Mõlemad tehnikad kasutavad proovi läbimiseks veergu.
- Need tehnikad kasutavad proovide eraldamiseks ja tuvastamiseks pumpasid, detektoreid, ventiile ja tarkvara.
Mis vahe on FPLC ja HPLC vahel?
FPLC on teatud tüüpi vedelikkromatograafia, mida kasutatakse suurte biomolekulide, näiteks valkude, nukleotiidide ja peptiidide puhastamiseks. HPLC on teatud tüüpi vedelikkromatograafia, mida kasutatakse väikese molekulmassiga ühendite eraldamiseks. Niisiis, see on peamine erinevus FPLC ja HPLC vahel. Veelgi enam, FPLC kasutab pH ja juhtivuse monitore ning kaevu fraktsioonikogujatena. Seevastu HPLC ei kasuta pH- ja juhtivuse monitore ega fraktsioonikogujaid.
Allpool olev infograafik loetleb tabelina rohkem erinevusi FPLC ja HPLC vahel.
Kokkuvõte – FPLC vs HPLC
Kromatograafia on laborianalüüsi meetod, mida kasutatakse komponentide eraldamiseks segust. See on jagatud mitmeks tüübiks, nagu kolonnkromatograafia, gaaskromatograafia, vedelikkromatograafia, ioonvahetuskromatograafia jne. FPLC ja HPLC on kahte tüüpi vedelikkromatograafia tehnikaid. FPLC on teatud tüüpi vedelikkromatograafia, mida kasutatakse suurte biomolekulide, näiteks valkude, nukleotiidide ja peptiidide puhastamiseks. Teisest küljest on HPLC teatud tüüpi vedelikkromatograafia, mida kasutatakse väikese molekulmassiga ühendite eraldamiseks. Seega on see kokkuvõte sellest, mis vahe on FPLC ja HPLC vahel.
