Põhiline erinevus HPLC ja kiire HPLC vahel on see, et HPLC jaoks kasutatav pumba rõhk on umbes 40 MPa, samas kui pumba rõhk kiire HPLC jaoks on umbes 3–5 MPa.
Kõige tavalisem meetod, mida segu komponentide eraldamiseks kasutame, on vedelikkromatograafia. Selle eesmärgi saavutamiseks on mitu tehnikat, millest HPLC on väga populaarne. HPLC tähistab kõrgjõudlusega vedelikkromatograafiat, mis identifitseerib, kvantifitseerib ja eraldab vedela segu komponendid kiiresti ja tõhus alt. Kiire HPLC on HPLC spetsiaalne rakendus, mis on viimasel ajal pälvinud lahenduste uurimisega seotud isikute tähelepanu.
Mis on HPLC?
HPLC on kõrgsurvevedelikkromatograafia. See kasutab kõrgsurvet, et suruda lahusteid nii, et need läbivad kolonni. Samuti on see ideaalne viis erinevate ühendite, nagu aminohapped, nukleiinhapped, süsivesikud, steroidid, antibiootikumid ja süsivesinikud, eraldamiseks ja uurimiseks. HPLC-l on teiste segude eraldamise meetodite ees palju eeliseid, nagu kõrgem eraldusvõime ja kiirem analüüs. See kaotab vajaduse ümberpakkimise ja regenereerimise järele ning pakub paremat kontrolli parameetrite üle, suurendades seeläbi eraldamise tõhusust. Ideaalis sobib HPLC suuremahuliste rakenduste jaoks, kuna see suudab eraldada väga väikseid osakesi ja võimaldab kasutada kõrget rõhku, mis muudab lahustite hõlpsaks voolamiseks.
Joonis 01: HPLC veerg
Lühid alt öeldes on HPLC tehnika töömeetod järgmine. Esiteks peaksime proovi pumba abil väikestes kogustes liikuva faasi voolu sisestama. Pumba rõhku tuleks hoida 40 MPa. See liikuva faasi voog imbub läbi HPLC kolonni. Seejärel läbivad kolonni ka proovi komponendid. Kuid nende liikumiskiirused erinevad üksteisest proovikomponentide ja kolonnis oleva adsorbendi vastastikmõjude erinevuse tõttu. Nimetame seda adsorbenti statsionaarseks faasiks, kuna see asub kolonni sees (ei liigu). Seejärel saame kolonni lõpus koguda kolonnist elueeruva proovi, seega saame proovis olevad komponendid eraldi koguda.
Mis on kiire HPLC?
Hiljuti töötasid Schering Plough uurimisinstituudi teadlased välja kiir-HPLC tehnika, mis on HPLC täiustatud versioon, kuna võimaldab ühendeid segust veelgi kiiremini eraldada. See meetod, tuntud ka kui kiire HPLC, kasutab 2,7 um sulatatud tuumaga ränidioksiidi osakesi, mis on valmistatud 0,5 um poorse ränidioksiidi sulatamisega tahke ränidioksiidi osakese külge. Need ainulaadselt valmistatud osakesed muudavad eraldamise väga kiireks ja seda ka madala vasturõhuga kui see, mida me kasutame HPLC-s.
Joonis 02: FPLC-seade
Kiire HPLC annab UPLC-ga võrreldavad tulemused, kuid teadlased leiavad, et see tehnika on parem, kuna see ei nõua väga kalleid ülikõrgsurveseadmeid. Suurepärane on see, et kiire HPLC ei nõua uusi laboriprotokolle.
Mis vahe on HPLC ja kiire HPLC vahel?
HPLC on kõrgsurvevedelikkromatograafia ja kiire HPLC on kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia täiustatud vorm. Peamine erinevus HPLC ja kiire HPLC vahel on see, et HPLC jaoks kasutatav pumba rõhk on umbes 40 MPa. Kusjuures, pumba rõhk kiire HPLC jaoks on umbes 3-5 MPa. Lisaks saame HPLC tehnika abil eraldada erinevaid ühendeid, nagu aminohapped, nukleiinhapped, süsivesikud, steroidid, antibiootikumid ja süsivesinikud, samas kui kiir-HPLC tehnikat kasutatakse peamiselt valkude eraldamiseks.
Allpool olev infograafik annab rohkem teavet HPLC ja kiire HPLC erinevuse kohta.
Kokkuvõte – HPLC vs kiire HPLC
HPLC on vedelikkromatograafia tehnika, mis on muutunud väga populaarseks kogu maailmas. Fast HPLC on HPLC uus versioon, Schering Plough Institute'i teadlased töötasid selle uue tehnika välja. Peamine erinevus HPLC ja kiire HPLC vahel seisneb pumba rõhus, mida me eraldamiseks kasutame. See on; pumba rõhk, mida kasutame HPLC jaoks, on umbes 40 MPa. Kuid pumba rõhk kiire HPLC jaoks on umbes 3–5 MPa.
