Peamine erinevus pöördfaasi ja normaalfaasi HPLC vahel on see, et pöördfaasi HPLC kasutab mittepolaarset statsionaarset faasi ja polaarset liikuvat faasi, samas kui normaalfaasi HPLC kasutab polaarset statsionaarset faasi ja vähem polaarset liikuvat faasi.
Normaalfaasi HPLC on vanim HPLC meetod, mida Tswett kasutas taimeekstraktide eraldamisel; ta kasutas klaaskolonnis kriiti. See oli klassikaline kromatograafia viis, mis viis selle nimetamiseni "tavaliseks" tehnikaks. Pöördfaasiline HPLC on vastupidine tavapärasele tehnikale, mille teadlased viimasel ajal välja töötasid.
Mis on pöördfaasi HPLC?
Pöördfaasiline HPLC on kromatograafiline meetod, milles kasutame hüdrofoobset statsionaarset faasi. Kõigist HPLC meetoditest kasutame seda meetodit ligikaudu 70% selle laialdase rakendatavuse ja reprodutseeritavuse tõttu. Statsionaarne faas on mittepolaarne ja liikuv faas on polaarne.
Enamasti kasutavad teadlased liikuva faasina vee vesilahust koos seguneva polaarse orgaanilise lahustiga, nagu atsetonitriil või metanool. Seetõttu interakteeruvad analüüdid mittepolaarse statsionaarse faasiga.
Mis on normaalfaasi HPLC?
Normaalfaasi HPLC on kromatograafiline meetod, milles kasutame hüdrofiilset statsionaarset faasi. See on traditsiooniline HPLC meetod, kuigi me seda nii palju ei kasuta. Statsionaarne faas on polaarne ja liikuv faas on mittepolaarne. Veelgi olulisem on see, et selle tehnika liikuv faas on 100% orgaaniline. See tähendab, et selleks ei kasutata vett.
Joonis 01: Normaalfaasi ja pöördfaasi HPLC kromatogrammide prooviprofiil vastav alt analüüdis sisalduvate komponentide polaarsusele.
Tavaliselt sisaldab statsionaarne faas ränidioksiidi, tsüano-, diooli-, aminosidemega faase jne. Liikuvad faasid hõlmavad orgaanilisi lahusteid, nagu heksaan, etüülatsetaat jne. See meetod põhineb lahusti või analüüdi molekulide kinnipidamisel polaarne statsionaarne faas.
Mis vahe on pöördfaasi ja normaalfaasi HPLC vahel?
Pöördfaasiline HPLC on kromatograafiline meetod, milles kasutame hüdrofoobset statsionaarset faasi. Selle tehnika statsionaarne faas on mittepolaarne, liikuv faas aga polaarne. Lisaks kasutavad teadlased pöördfaasi HPLC-s liikuva faasina vee vesilahust seguneva polaarse orgaanilise lahustiga, nagu atsetonitriil või metanool. Seevastu normaalfaasi HPLC on kromatograafiline meetod, milles kasutame hüdrofiilset statsionaarset faasi. Selle tehnika statsionaarne faas on polaarne, liikuv faas aga mittepolaarne. Lisaks sellele kasutavad teadlased normaalfaasi HPLC liikuva faasina orgaanilisi lahusteid, nagu heksaan, etüülatsetaat jne. Allolev infograafik näitab erinevust pöördfaasi ja normaalfaasi HPLC vahel tabeli kujul.
Kokkuvõte – pöördfaas vs normaalfaas HPLC
Pöördfaasi ja normaalfaasi HPLC tehnikad on kaks vedelikkromatograafilist tehnikat. Peamine erinevus pöördfaasi ja normaalfaasi HPLC vahel on see, et pöördfaasi HPLC kasutab mittepolaarset statsionaarset faasi ja polaarset liikuvat faasi, samas kui normaalfaasi HPLC kasutab polaarset statsionaarset faasi ja vähem polaarset liikuvat faasi.
