Põhiline erinevus HPLC ja UPLC vahel on see, et HPLC võimaldab analüüsida osakesi, mille suurus on umbes 5 mikromeetrit, samas kui UPLC võimaldab palju väiksemaid osakesi, mille suurus on umbes 2 mikromeetrit.
HPLC ja UPLC on mõlemad vedelikkromatograafilised meetodid, mis on kasulikud ühendi komponentide eraldamisel. Et teada saada erinevust HPLC ja UPLC vahel, peame kõigepe alt teadma, mis on HPLC. Seda seetõttu, et UPLC on HPLC eriversioon ja me saame sellest hõlpsasti aru, kui teame, mis on HPLC.
Mis on HPLC?
Termina HPLC tähistab kõrgjõudlusega vedelikkromatograafiat. See on tehnika, mida saame kasutada ühendi erinevate koostisosade eraldamiseks. Samuti on see kõige laialdasem alt kasutatav tehnika segu komponentide tuvastamiseks, kvantifitseerimiseks ja eraldamiseks. Peale selle kasutatakse selle tehnika puhul lahustite läbi kolonni surumiseks kõrget rõhku. Lisaks on HPLC peamised rakendused biokeemias ühendi koostisosade analüüsimiseks. See on ideaalne viis aminohapete, nukleiinhapete, valkude, süsivesinike, pestitsiidide, süsivesikute, antibiootikumide, steroidide ja paljude muude anorgaaniliste ainete eraldamiseks ja tuvastamiseks.
Joonis 01: HPLC süsteem laboris
Lühid alt öeldes on HPLC tehnika töömeetod järgmine. Esiteks peaksime proovi pumba abil väikestes kogustes liikuva faasi voolu sisestama. Pumba rõhku tuleks hoida 40 MPa. Seejärel imbub see liikuva faasi voog läbi HPLC kolonni. Samuti läbivad proovis olevad komponendid kolonni. Nende liikumiskiirused on aga üksteisest erinevad. See erinevus tuleneb proovi komponentide ja kolonnis oleva adsorbendi interaktsioonide erinevusest. Nimetame seda adsorbenti statsionaarseks faasiks, kuna see asub kolonni sees (ei liigu). Teiseks saame kolonni lõpus koguda proovi, mis kolonnist elueerub. Seal saame määrata iga proovi komponendi retentsiooniaegade erinevused.
Mis on UPLC?
Termina UPLC tähistab ülikõrge jõudlusega vedelikkromatograafiat. See on HPLC variatsioon, kuid töömeetod on sama. Kuid erinev alt HPLC-st võimaldab see meetod analüüsida väga väikeseid osakesi, näiteks 2 mikromeetriseid väikeseid osakesi.
Joonis 02: UPLC-seade
Lisaks pakub see kiiremat analüüsi. Selle tehnika puhul kasutame proovi kolonni sisestamiseks pumba rõhku 100 MPa. Seega kinnitab see kõrge rõhk, et kogu proov sisestatakse kolonni. Seega on see HPLC-ga võrreldes väga tõhus.
Mis vahe on HPLC ja UPLC vahel?
Termina HPLC tähistab kõrgjõudlusega vedelikkromatograafiat, termin UPLC aga ülikõrge jõudlusega vedelikkromatograafiat. Seetõttu on UPLC-tehnika HPLC arendatud versioon. Seega on mõlema tehnika töömeetod sama. Siiski on UPLC võrreldes HPLC-ga tõhusam, kuna kasutab kõrget pumba rõhku; pumba rõhk HPLC puhul on 40 MPa, UPLC puhul aga 100 MPa. Seetõttu on see erinevus HPLC ja UPLC vahel. Peamine erinevus HPLC ja UPLC vahel seisneb eelkõige selles, et HPLC võimaldab analüüsida osakesi, mille suurus on umbes 5 mikromeetrit, samas kui UPLC võimaldab palju väiksemaid osakesi, mille suurus on umbes 2 mikromeetrit.
Kokkuvõte – HPLC vs UPLC
UPLC on HPLC vorm. Seega on töömeetodid samad. Kuid võrreldes HPLC-ga leiame UPLC-s mõningaid täiustatud funktsioone. Seetõttu on HPLC ja UPLC vahel teatav erinevus. Peamine erinevus HPLC ja UPLC vahel on aga see, et HPLC võimaldab analüüsida osakesi, mille suurus on umbes 5 mikromeetrit, samas kui UPLC võimaldab palju väiksemaid osakesi, mille suurus on umbes 2 mikromeetrit.
