Põhierinevus – HPLC vs HPTLC
Põhiline erinevus HPLC ja HPTLC vahel on see, et HPLC võimaldab komponentide kvantitatiivset eraldamist proovis, samas kui HPTLC ei võimalda proovi komponentide kvantitatiivset eraldamist.
Kromatograafia on füüsikaline eraldamismeetod, mida kasutatakse segu komponentide eraldamiseks ja tuvastamiseks. Nii HPLC kui ka HPTLC on kromatograafilised meetodid. HPLC on kõrgsurvevedelikkromatograafia. HPTLC on suure jõudlusega õhukese kihi kromatograafia.
Mis on HPLC?
HPLC on kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia. See on analüütiline meetod, mida kasutatakse segu komponentide eraldamiseks, tuvastamiseks ja kvantifitseerimiseks. Selle tehnika puhul lahustatakse proov sobivas lahustis. Seejärel juhitakse lahusti koos prooviga läbi etteantud rõhuga pumba. Pump on täidetud tahke adsorbeeriva materjaliga. Siis seostuvad mõned komponendid tugev alt imava materjaliga, teised aga lõdv alt. See põhjustab komponentide erineva voolukiiruse läbi pumba. Seetõttu saab komponente kergesti eraldada.
Joonis 01: HPLC-süsteem
Pumba täitvat adsorbeerivat materjali nimetatakse statsionaarseks faasiks. Lahusti koos lahustunud prooviga nimetatakse liikuvaks faasiks. Selles tehnikas kasutatavat pumpa nimetatakse kolonniks. Kolonn on täidetud adsorbeeriva materjaliga, enamasti ränidioksiidi osakestega. Nende osakeste suurus võib olla vahemikus 2–50 μm. Eraldamisprotsessi mõjutavad liikuva faasi koostis ja süsteemi temperatuur. Statsionaarse faasi ja proovis oleva komponendi vahelised vastasmõjud võivad olla hüdrofoobsed interaktsioonid, dipool-dipool vastastikmõjud, ioonsed sidemed jne.
HPLC töörõhk on tunduv alt kõrgem kui traditsioonilisel vedelikkromatograafial. See on umbes 50-350 baari. Vedelikkromatograafia ja HPLC erinevus seisneb selles, et vedelikkromatograafias langeb proov raskusjõu mõjul läbi kolonni, samas kui HPLC puhul on proov rõhu all läbi kolonni. Samuti on kolonni suurus ja absorbeerivad osakesed traditsioonilise vedelikkromatograafiaga võrreldes väga väikesed. Siiski on HPLC tehnikaga antud eraldusvõime parem.
Mis on HPTLC?
HPTLC on suure jõudlusega õhukese kihi kromatograafia. See on traditsioonilise TLC täiustatud ja automatiseeritud vorm. See tehnika tagab tõhusa lahenduse lühikese aja jooksul. Selle analüüsimeetodi puhul saab proovi ja võrdlusmaterjali analüüsida üheaegselt, mis võimaldab võrrelda proovi võrdlusmaterjaliga. See annab parema analüütilise täpsuse kui teised kromatograafilised tehnikad. Analüüsi jaoks kulub vähem aega. Tehnika on odav tehnika.
Joonis 02: Toiduvärvide analüüs HPTLC abil
HPLC meetod on lihtne protsess ja proovi ettevalmistamise etapp on samuti välistatud (tavalises TLC-s sisaldub proovi ettevalmistamise etapp enne eraldamist. See etapp hõlmab puhastamist ja rikastamist). Lahustit saab kasutada otse ilma eeltöötluseta, kuigi muud kromatograafilised meetodid nõuavad eeltöötlust, nagu degaseerimine, filtreerimine jne.
HPLC-s kasutatav adsorbentmaterjal on väga väikeste osakeste suurusega ränidioksiid. Traditsioonilises TLC-s on ränidioksiidi osakeste suurus 5–20 μm, samas kui HPTLC puhul on see 4–8 μm. Proov kantakse aplikaatori abil HPTLC plaadile. See annab ühtlase ja ohutu rakenduse. Seejärel asetatakse plaadid liikuva faasiga kambrisse. Kamber peaks olema küllastunud liikuva faasi auruga. Pärast HPTLC protsessi saab tuvastada liikunud laigud. Plaadil olevate laikude tuvastamisel kasutab HPTLC meetod sobivat UV-ala või joodikambrit.
Mis vahe on HPLC ja HPTLC vahel?
HPLC vs HPTLC |
|
| HPLC on kõrgjõudlusega vedelikkromatograafia. | HPTLC on suure jõudlusega õhukese kihi kromatograafia. |
| Tehnika | |
| HPLC puhul juhitakse liikuv faas koos lahustiga läbi statsionaarse faasiga täidetud kolonni. | HPLC-s kantakse proov TLC plaadile ja asetatakse liikuvat faasi sisaldavasse kambrisse; siis lastakse proovil koos liikuva faasiga plaadil ülespoole liikuda. |
| Mõõtmine | |
| HPLC puhul kasutatakse proovi komponentide eraldamiseks kolonni läbivate komponentide voolukiiruste erinevusi. | HPLC-s kasutatakse valimi komponentide eraldamiseks erinevusi valimi iga komponendi läbitud vahemaade vahel. |
| Kvantitatiivne eraldamine | |
| HPLC võimaldab komponentide kvantitatiivset eraldamist proovis. | HPTLC ei võimalda proovi komponentide kvantitatiivset eraldamist. |
Kokkuvõte – HPLC vs HPTLC
HPLC ja HPTLC on kaks kromatograafilist tehnikat. Peamine erinevus HPLC ja HPTLC vahel on see, et HPLC võimaldab komponentide kvantitatiivset eraldamist proovis, samas kui HPTLC ei võimalda proovi komponentide kvantitatiivset eraldamist.
