Põhiline erinevus RP HPLC ja HIC vahel on see, et RP HPLC kasutab polaarsemat liikuvat faasi ja vähem polaarset statsionaarset faasi. HIC kasutab aga hüdrofoobset statsionaarset faasi, mis võimaldab hüdrofoobsetel molekulidel sellega kinnituda.
Kromatograafia on analüütiline meetod, mis aitab segu komponentideks eraldada. Esiteks peame lahustama eraldatava proovi lahusesse. Seda lahuse-aine segu nimetatakse liikuvaks faasiks. Seejärel juhitakse liikuv faas läbi teise materjali, mida nimetatakse statsionaarseks faasiks. Statsionaarne faas määrab komponentide eraldatuse. Eraldumine toimub materjali jaotumise tõttu liikuva ja statsionaarse faasi vahel.
Mis on RP HPLC?
Termina RP HPLC tähistab pöördfaasi kõrgjõudlusega vedelikkromatograafiat. See hõlmab segu komponentide eraldamist vastav alt hüdrofoobsusele. Liikuvas faasis olevad hüdrofoobsed komponendid seostuvad statsionaarses faasis olevate immobiliseeritud hüdrofoobsete liganditega, samas kui hüdrofiilsed komponendid elueeruvad läbi statsionaarse faasi, kinnitumata statsionaarse faasi pinnaga.
Joonis 01: HPLC seade
Lisaks on sellel meetodil teiste kromatograafiliste tehnikatega võrreldes parem reprodutseeritavus ja see näitab ka laialdast rakendatavust. Seetõttu kasutame seda meetodit laborites enam kui 75% kõigist HPLC meetoditest. Enamasti kasutame liikuva faasina vee vesilahust koos seguneva polaarse orgaanilise lahustiga. Seega tagab see lahuses olevate hüdrofoobsete komponentide kinnitumise statsionaarse faasi pinnale.
Mis on HIC?
Termina HIC tähistab hüdrofoobse interaktsiooni kromatograafiat. See on pöördfaasi HPLC tüüp ja seda meetodit kasutatakse peamiselt suurte biomolekulide, näiteks valkude eraldamiseks. Selle meetodi puhul peame biomolekuli proovi valmistamiseks kasutama vesikeskkonda. Põhjus on selles, et orgaanilised lahustid võivad põhjustada valkude denatureerumist. Veelgi enam, see meetod kasutab suurte molekulide koostoimet statsionaarse faasi kergelt hüdrofoobse pinnaga. Lisaks peame proovis kasutama kõrget soolakontsentratsiooni, kuna see soodustab valgu säilimist pakendil; seda protsessi nimetatakse väljasoolamiseks. Vähendades soola kontsentratsiooni järk-järgult, saame panna biomolekulid elueeruma eraldi vastav alt nende hüdrofoobsusele.
Tavaliselt kasutab see meetod ioonivahetuskromatograafiaga võrreldes vastupidiseid tingimusi. Selle tehnika puhul peame kõigepe alt laskma läbi kolonni puhverlahuse, et vähendada lahustunud aine lahustumist proovis. See paneb valgu hüdrofoobsed piirkonnad paljastama. Kui aga molekul on hüdrofoobsem, on seondumise soodustamiseks vaja vähem soola. Siin elueeritakse esimesena vähem hüdrofoobsed lahustunud ained ja vastav alt soola kontsentratsiooni muutusele elueeritakse hüdrofoobsemad lahustunud ained viimasena.
Mis vahe on RP HPLC ja HIC vahel?
Kromatograafia on analüütiline meetod segu komponentide eraldamiseks. RP HPLC ja HIC on kaks spetsiaalset kromatograafilist tehnikat. Peamine erinevus RP HPLC ja HIC vahel on see, et RP HPLC kasutab polaarsemat liikuvat faasi ja vähem polaarset statsionaarset faasi, samas kui HIC kasutab hüdrofoobset statsionaarset faasi, mis võimaldab hüdrofoobsetel molekulidel selle külge kinnituda.
Allpool olev infograafik võtab kokku erinevuse RP HPLC ja HIC vahel.
Kokkuvõte – RP HPLC vs. HIC
Kromatograafia on analüütiline meetod segu komponentide eraldamiseks. RP HPLC ja HIC on kaks spetsiaalset kromatograafilist tehnikat. Peamine erinevus RP HPLC ja HIC vahel on see, et RP HPLC kasutab polaarsemat liikuvat faasi ja vähem polaarset statsionaarset faasi, samas kui HIC kasutab hüdrofoobset statsionaarset faasi, mis võimaldab hüdrofoobsetel molekulidel sellega kinnituda.
