Peamine erinevus – in situ hübridiseerimine vs immunohistokeemia
Vähktõve ja nakkushaiguste diagnostika on populaarne suund, kus kasutatakse uudseid proteoomikal ja genoomikal põhinevaid tehnikaid kasvajate või nakkuslike rakkude, nende proliferatsiooni ja rakkude arengukohtade tuvastamiseks ning kõige nakkavamate ja nakkushaiguste geneetilise aluse analüüsimiseks. mittenakkuslikud haigused. Selle tulemuseks on ravimite täpne töötlemine ja kavandamine ning haiguste jaoks kohandatud ravimeetodite väljatöötamine. In situ hübridisatsioon (ISH) ja immunohistokeemia (IHC) on kaks sellist vähibioloogias laialdaselt kasutatavat tehnikat ning peamine erinevus in situ hübridisatsiooni ja immunokeemia vahel seisneb analüüsiprotseduuris kasutatavates molekulides. ISH puhul kasutatakse analüüsiks nukleiinhappesonde, samas kui IHC puhul kasutatakse diagnostiliseks määramiseks monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi.
Mis on in situ hübridiseerimine (ISH)?
In situ hübridisatsioon on nukleiinhapete hübridisatsioonitehnika, mis viiakse läbi otse koe osal või lõigul, terves koes või rakkudes. Tehnika sõltub Watson Cricki komplementaarse aluste sidumise teooriast, mille tulemuseks on kas DNA-DNA hübriidid või DNA-RNA hübriidid, mis suudavad tuvastada muteerunud geene või tuvastada vajaliku huvipakkuva geeni. Hübridisatsioonitehnikas kasutatakse sondidena üheahelalisi DNA järjestusi, kaheahelalisi DNA järjestusi, üheahelalisi RNA järjestusi või sünteetilisi oligonukleotiidjärjestusi ning need sondid märgistatakse radioaktiivse fosforiga selle 5'-otsas identifitseerimiseks autoradiograafias või märgistatakse fluorestsentsvärvidega.. Saadaval on erinevat tüüpi ISH-tehnikaid, mis põhinevad kasutatava sondi tüübil ja järgitava visualiseerimistehnika tüübil.
Joonis 01: Fluorestseeruv in situ hübridisatsioon
ISH-l on palju rakendusi, peamiselt nakkushaiguste molekulaardiagnostikas, et tuvastada patogeenide olemasolu ja kinnitada patogeeni molekulaardiagnostika abil. Seda kasutatakse ka arengubioloogia, karüotüpiseerimise ja filogeneetilise analüüsi ning kromosoomide füüsilise kaardistamise valdkonnas.
Mis on immunohistokeemia (IHC)?
IHC tehnikas on peamine analüüsitav molekul antigeen. IHC ajal kasutatakse monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi, et määrata antigeenide olemasolu infektsiooni või pahaloomuliste rakkude proliferatsiooni seisundi korral. Meetod põhineb antigeeni-antikeha sidumisel ja selle tehnika jaoks kasutatakse ensüümimärgiseid; Üks selline rakendus on ELISA (ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs). Markeriteks võivad olla ka fluorestsentsmärgisega antikehad või radiomärgistatud antikehad.
Joonis 02: Immunohistokeemia
IHC-d kasutatakse laialdaselt vähirakkude tuvastamiseks. Diagnostilised protseduurid on suunatud kasvajarakkudes esinevatele antigeenidele, et tuvastada ja iseloomustada kasvajat. Sama protseduur on lisatud nakkusetekitajate diagnoosimiseks. Monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi kasutatakse ka erinevate geeniproduktide analüüsimiseks, võimaldades antikeha-antigeeni sidumisreaktsiooni soovitud valgu ja manustatud sünteetilise antikeha vahel.
Millised on in situ hübridisatsiooni ja immunohistokeemia sarnasused?
- ISH ja IHC on väga spetsiifilised reaktsioonid.
- Mõlemad tehnikad on väga täpsed.
- Mõlemat tehnikat saab kasutada vähi ja nakkushaiguste diagnostikas.
- Neid tehnikaid tehakse steriilsetes in vitro keskkondades.
- Mõlemad on kiired tehnikad, mis annavad korratavaid tulemusi.
- ISH ja IHC kasutavad tuvastamismeetodeid, nagu raadiomärgistus ja fluorestsentstehnikad.
Mis vahe on in situ hübridiseerimisel ja immunohistokeemial?
In situ hübridiseerimine vs immunohistokeemia |
|
| ISH on nukleiinhapete hübridisatsioonitehnika, mis viiakse läbi otse koe osal või lõigul või kogu koel. | IHC on tehnika, kus monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi kasutatakse antigeenide olemasolu määramiseks, mis on rakupindadele paigutatud spetsiaalsed valgumarkerid. |
| Analüüsitud biomolekulide tüüp | |
| ISH analüüsib nukleiinhappeid. | IHC analüüsib valke-antigeene. |
| Biokeemilise reaktsiooni alused | |
| Selles tehnikas toimub DNA-DNA või DNA-RNA vaheline komplementaarne aluste sidumine. | Antigeeni-antikeha interaktsioonid on seotud immunohistokeemiaga. |
| Ensüümiga seotud tuvastamismeetodid | |
| Ensüümiga seotud tuvastamismeetodeid ei saa ISH-is kasutada. | Ensüümiga seotud tuvastamismeetodeid saab kasutada IHC-s. |
Kokkuvõte – in situ hübridiseerimine vs immunohistokeemia
Molekulaardiagnostika on kiired ja kinnitavad meetodid, mida saab kasutada mittenakkusliku haiguse, nagu vähk või nakkushaigused, nagu HIV või tuberkuloos, tuvastamiseks rakkudes esinevate molekulaarsete markerite põhjal, mis põhjustavad haiguse avaldumist.. Molekulaarsed markerid võivad esineda ekspresseeritud valkude kujul või geneetilisel tasemel, mille põhjal võetakse kasutusele erinevad uudsed meetodid, et suurendada tõhusust ja mis on vähem töömahukad, kuigi nende tehnikatega kaasneb kõrge hind. Seega sõltub ISH DNA-DNA või DNA-RNA hübriidi moodustumisest ja IHC sõltub spetsiifilistest reaktsioonidest antikeha ja antigeeni vahel. See on erinevus in situ hübridisatsiooni vahel.
In situ hübridiseerimise vs immunohistokeemia PDF-versiooni allalaadimine
Saate alla laadida selle artikli PDF-versiooni ja kasutada seda võrguühenduseta kasutamiseks vastav alt tsitaadi märkusele. Palun laadige PDF-versioon alla siit. Erinevused in situ hübridiseerimisel ja immunohistokeemial.
