Peamine erinevus – immunofluorestsents vs immunohistokeemia
Haiguste diagnostika, mis kasutab molekulaarbioloogilisi meetodeid, on muutunud kliinilise laboritehnoloogia esilekerkivaks valdkonnaks. See sisaldab kõiki teste ja meetodeid haiguse tuvastamiseks ja haiguse põhjuse mõistmiseks, analüüsides DNA, RNA või ekspresseeritud valke organismis. Molekulaardiagnostika kiired edusammud on võimaldanud läbi viia nakkus- ja mittenakkushaiguste alusuuringuid. Neid kasutatakse haigusega seotud oluliste geenide või valkude järjestuse või ekspressioonitasemete muutuste määramiseks. Immunofluorestsents (IF) ja immunohistokeemia (IHC) on kaks sellist vähibioloogias laialdaselt kasutatavat tehnikat. IF on IHC tüüp, kus monoklonaalsete ja polüklonaalsete antikehade analüüsimiseks kasutatakse fluorestsentsi tuvastamise meetodit, samas kui IHC kasutab monoklonaalsete ja polüklonaalsete antikehade tuvastamiseks keemilisi meetodeid. See on peamine erinevus IF ja IHC vahel.
Mis on immunofluorestsents (IF)?
Immunofluorestsents on tuvastamistehnika, mille puhul testis kasutatud antikehad märgistatakse, kasutades tuvastamise eesmärgil fluorestseeruvaid värvaineid või fluorestseeruvaid valke. Märgistatud sekundaarsed antikehad võivad põhjustada soovimatuid taustsignaale; seetõttu põhineb IF-tehnika praegu primaarse antikeha enda märgistamisel, et vältida soovimatuid signaale tuvastamise ajal. Selle tehnika abil välditakse mittespetsiifilist seondumist primaarse ja sekundaarse antikeha vahel ning see on kiirem, kuna puudub sekundaarne inkubatsioonietapp. Samuti on paranenud andmete kvaliteet.
Joonis 01: Kahekordne immunofluorestsentsvärvimine BrdU, NeuN ja GFAP jaoks
Fluorokroomid ehk fluorestseeruvad värvained on ühendid, mis võivad neelata kiirgust, eelistatav alt ergastavat ultraviolettkiirgust. Kui osakesed jõuavad ergastatud olekust põhiolekusse, kiirgavad nad kiirgust, mille detektor püüab kinni ja tuvastab spektri moodustamiseks. On väga oluline, et fluorestseeruv märgis oleks konkreetse reaktsiooni jaoks ühilduv ja stabiilne ning et see oleks täpsete tulemuste saamiseks korralikult konjugeeritud antikehaga. Üks enimkasutatavaid fluorokroome on fluorestseiini isotiotsüanaat (FITC), mis on rohelist värvi, mille neeldumise ja emissiooni tipplainepikkused on vastav alt 490 nm ja 520 nm. Rodamiin, teine IF-s kasutatav aine, on punast värvi ning sellel on erinevad neeldumise ja emissiooni lainepikkused 553 nm ja 627 nm.
Mis on immunohistokeemia (IHC)?
IHC on molekulaarne testimismeetod, mida kasutatakse antigeeni esinemise tuvastamiseks ja kinnitamiseks sihtrakus. Sihtrakuks võib olla nakkav osake, mikroobne patogeen või pahaloomuline kasvajarakk. IHC kasutab sihtrakkude rakupinnal olevate antigeenide olemasolu määramiseks monoklonaalseid ja polüklonaalseid antikehi. Meetod põhineb antigeeni ja antikeha sidumisel. Nende antikehadega konjugeeritakse tuvastamismarker, et tuvastada konkreetse antigeeni olemasolu või puudumine. Need markerid võivad olla keemilised markerid, nagu ensüümid, fluorestseeruv alt märgistatud antikehad või radiomärgistatud antikehad.
Joonis 02: Immunohistokeemiaga värvitud hiire-ajulõik
IHC kõige populaarsem rakendus on vähirakkude bioloogias pahaloomuliste kasvajate tuvastamiseks, kuid seda kasutatakse ka nakkushaiguste avastamiseks.
Millised on immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia sarnasused?
- Immunofluorestsents ja immunohistokeemia toimuvad in vitro tingimustes.
- Mõlemad tehnikad põhinevad antigeen-antikehal
- Mõlemad on väga kiired tehnikad.
- Tehnikate tulemused on reprodutseeritavad.
- Mõlemal on parem andmekvaliteet.
- Neid tehnikaid kasutatakse vähi ja nakkushaiguste diagnostikas.
Mis vahe on immunofluorestsentsil ja immunohistokeemial?
Immunofluorestsents vs immunohistokeemia |
|
| IF on tuvastamistehnika, mille puhul testis kasutatud antikehad märgistatakse, kasutades tuvastamiseks fluorestseeruvaid värvaineid või fluorestseeruvaid valke. | IHC on tuvastamistehnika, mille puhul testis kasutatud antikehad märgistatakse, kasutades tuvastamiseks kemikaale või radioaktiivseid elemente. |
| Täpsus | |
| Täpsus on kõrgem IF-tehnikas võrreldes IHC-ga. | IHC täpsus on madalam. |
| Konkreetsus | |
| IF on täpsem. | IHC on vähem spetsiifiline. |
Kokkuvõte – immunofluorestsents vs immunohistokeemia
Molekulaarsed mehhanismid on toonud kaasa palju muutusi meditsiini valdkonnas, mis on toonud kaasa arenenud molekulaarsete testimismeetodite, mis on toonud kaasa revolutsiooni diagnostika valdkonnas. Need leiutised on viinud haiguse kiire ja täpse tuvastamiseni ja kinnitamiseni, võimaldades seeläbi ravimite edukat manustamist ja tootmist. Neid tehnikaid kasutatakse ka farmakoloogias, et leida ravimite sihtmärke ja kinnitada ravimi farmakokineetilisi omadusi ravimi metabolismi ajal. IF ja IHC on kaks diagnostilist meetodit, mis põhinevad antigeeni ja antikeha sidumise kontseptsioonil, kuigi mõlema tehnika tuvastamisviis on erinev. IF kasutab antigeeni tuvastamiseks fluorestsentsi põhimõtet ja IHC kasutab antigeeni tuvastamiseks keemilise konjugatsiooni kontseptsiooni. See on erinevus IF ja IHC vahel.
Laadi alla immunofluorestsentsi vs immunohistokeemia PDF-versioon
Saate alla laadida selle artikli PDF-versiooni ja kasutada seda võrguühenduseta kasutamiseks vastav alt tsitaadi märkusele. Palun laadige PDF-versioon alla siit Erinevused immunofluorestsentsi ja immunohistokeemia vahel.
