Põhierinevus otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel on see, et otsene immunofluorestsents kasutab ühte antikeha, mis töötab huvipakkuva sihtmärgi vastu, samas kui kaudne immunofluorestsents kasutab huvipakkuva sihtmärgi märgistamiseks kahte antikeha.
Immunofluorestsents või raku kuvamine on meetod, mida kasutatakse spetsiifilise sihtantigeeni märgistamiseks fluorofooriga. Siin on fluorofoor fluorestseeruv keemiline ühend, mis võib valguse ergutamisel valgust uuesti kiirata. Kui fluorofoor seondub sihtantigeeniga, võimaldab see sihtmolekuli tuvastada proovis. Kui antigeen seondub spetsiifilise antikehaga, võib selle edasiseks kirjeldamiseks konjugeerida fluorofooridega. Seega on fluorestsentsmikroskoobi all vaadeldes sihtantigeeni olemasolu proovis lihtne tuvastada.
Pealegi on olemas kahte tüüpi immunofluorestsentsi; otsene ja kaudne immunofluorestsents. Erinevus otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel seisneb peamiselt kasutatud antikehade arvus ja fluorofoori konjugatsioonis. See tähendab, et otsese immunofluorestsentsi korral konjugeerub fluorofoor otse primaarse antikehaga, samas kui kaudse immunofluorestsentsi korral konjugeerub fluorofoor sekundaarse antikehaga.
Mis on otsene immunofluorestsents?
Immunofluorestsents kasutab spetsiifiliste sihtantigeenide tuvastamiseks antikehi. Otsene immunofluorestsents on üks kahest immunofluorestsentsi tüübist. Otsese immunofluorestsentsi korral hõlmab üksik antikeha (primaarne antikeha) ja fluorofoor konjugeerub otse primaarse antikehaga. Antikeha sidumisel sihtantigeeniga kiirgab fluorofoor fluorestsentsi, mida saab tuvastada fluorestsentsmikroskoobiga.
Joonis 01: otsene immunofluorestsents
Kuid otsene immunofluorestsents on kallis meetod, kuna primaarsed konjugeeritud antikehad on sekundaarsete antikehadega võrreldes kulukad. Sellest hoolimata ei hõlma see täiendavat sammu, seega lühemat tehnikat. Lisaks vähenevad otsese immunofluorestsentsi korral mittespetsiifilised seondumised. Seetõttu on liikide ristreaktiivsus madal. Kuid tuvastamisel on otsese immunofluorestsentsi tundlikkus kaudse immunofluorestsentsiga võrreldes nõrk.
Mis on kaudne immunofluorestsents?
Kaudne immunofluorestsents on teist tüüpi immunofluorestsents, mis hõlmab sihtantigeeni märgistamisel kahte tüüpi antikehi, nagu primaarsed ja sekundaarsed antikehad. Selle meetodi puhul konjugeerub fluorofoor sekundaarse antikehaga. Seega hõlmab see tehnika täiendavat sammu.
Joonis 02: Immunofluorestsents
Selle meetodi tundlikkus on siiski kõrge, kuna mitut fluorofoori saab konjugeerida sekundaarsete antikehadega ja see muudab tuvastamise lihtsamaks. Lisaks on kaudne immunofluorestsents odavam, kuna sekundaarsete antikehade konjugeerimine on odavam ja lihtsam. Võrreldes otsese immunofluorestsentsiga on liikide ristreaktiivsus kaudse meetodi puhul kõrge.
Millised on otsese ja kaudse immunofluorestsentsi sarnasused?
- Need on kahte tüüpi immunofluorestsentstehnikad.
- Primaarsed antikehad ja fluorofoor hõlmavad mõlemat meetodit.
- Samuti toimub mõlema meetodi puhul antigeen-antikeha reaktsioon.
- Lisaks kasutab nii otsene kui ka kaudne immunofluorestsents antigeeni tuvastamiseks fluorestsentsmikroskoopi.
Mis vahe on otsesel ja kaudsel immunofluorestsentsil?
Immunofluorestsents võib olla otsene või kaudne, põhinedes fluorofoori konjugatsioonil kasutatud antikehadega. Otsese immunofluorestsentsi korral konjugeerub fluorofoor primaarse antikehaga, mis on selle tehnikaga seotud üksik antikeha. Vastupidiselt sellele konjugeerub fluorofoor kaudse immunofluorestsentsi korral sekundaarse antikehaga, mis on üks kahest meetodis kasutatavast antikehatüübist. Seega on otsese ja kaudse immunofluorestsentsi peamine erinevus antikeha tüüp, mis konjugeerub fluorofooriga.
Järgmine infograafik annab kõrvuti võrdluse otsese ja kaudse immunofluorestsentsi erinevusest.
Kokkuvõte – otsene vs kaudne immunofluorestsents
Immunofluorestsents on meetod, mida kasutatakse spetsiifiliste antigeenide esinemise tuvastamiseks proovis. See meetod kasutab spetsiifilisi antikehi. Seetõttu konjugeeritakse antikehad fluorofooridega, et tuvastada need fluorestsentsmikroskoobi abil. Lisaks on olemas kahte tüüpi immunofluorestsentsi, nimelt otsene ja kaudne immunofluorestsents. Otsene immunofluorestsents hõlmab ühte antikeha ja fluorofoori, mis on otseselt konjugeeritud selle antikehaga. Kaudne immunofluorestsents hõlmab kahte antikeha; primaarne ja sekundaarne ning sekundaarse antikehaga konjugeeritud fluorofoor. Kuna mitmed sekundaarsed antikehad võivad seostuda primaarse antikehaga ja mitmed fluorofoorid võivad konjugeerida sekundaarsete antikehadega, on kaudne immunofluorestsents tundlikum meetod kui otsene meetod. Lisaks on kaudne meetod odavam kui otsene meetod. Seega on see vahe otsese ja kaudse immunofluorestsentsi vahel.
