Põhiline erinevus rakkude üldarvu ja elujõuliste rakkude arvu vahel on see, et rakkude üldarv hindab kõiki rakke, sealhulgas nii elusaid kui ka surnud mikroobirakke proovis, samas kui elujõuliste rakkude arv hindab ainult proovis sisalduvaid elusaid mikroobirakke.
Populatsioonis olevate organismide arvu loendamist peetakse vajalikuks enamiku eksperimentaalsete tööde puhul. Seetõttu proovime analüüsida mikroobide arvu proovis, kasutades otseseid ja kaudseid meetodeid. Otsesed mõõtmised hõlmavad meetodeid, mis loendavad rakkude arvu otse. Kaudsed mõõtmised hõlmavad mõne parameetri mõõtmist, mida saab seostada rakkude arvuga, näiteks rakkude tihedus, kuivkaal jne. Mõned meetodid kvantifitseerivad proovis ainult elusaid mikroobirakke. Üks selline meetod on elujõuliste rakkude arv. Otsesed mikroskoopilised loendused kvantifitseerivad mikroskoobi abil kõik rakud teadaolevas koguses söötmes/proovis. Seetõttu loeb see nii elusaid kui ka surnud rakke. See on teatud tüüpi rakkude koguarv.
Mis on rakkude koguarv?
Rakkude üldloendus on meetod, mis hõlmab kõigi rakkude loendamist teadaolevas söötme/proovi mahus mikroskoobi ja loenduskambri (hemotsütomeetri) abil. Erinev alt elujõulisest loendusest loendatakse nii elusad kui ka surnud rakud. Seetõttu on see koguarv, välja arvatud juhul, kui vaatluse ajal rakendatakse elujõulisuse peitsi. Mikroskoopias vaadeldakse rakke otse mikroskoobi all ja loendatakse. See kasutab rakususpensiooni, mis koosneb mikroobirakkudest. Loendamise ja täpsete mõõtmiste hõlbustamiseks võib proovi lahjendada. Väga kõrge/madala rakkude kontsentratsiooni korral on rakkude koguarvu mikroskoobi abil saamine keeruline ülesanne.
Joonis 01: loenduskamber – hemotsütomeeter
Loendamiskambrid on lihtsad, odavad ja kiired kogu rakkude arvu mõõtmiseks. Kõige tähtsam on see, et loenduskambrid on kasulikud nii eukarüootide kui ka prokarüootide loendamiseks. Rakkude koguarvu kvantifitseerimiseks loendame rakud teadaoleva mahuga valitud ruutudes.
Mis on elujõuliste rakkude arv?
Elujõuliste rakkude loendus on meetod elusate mikroobirakkude loendamiseks proovis. See loeb proovis ainult elusrakke. Elujõuliste rakkude loendus, membraanfiltreerimine ja kõige tõenäolisem arv on vähesed elujõuliste rakkude loendamise meetodid. Need lähenemisviisid on kasvupõhised. Elujõuliste plaatide loendusmeetod on võimas meetod, mida kasutatakse paljudes mikrobioloogiavaldkondades, sealhulgas toidu- ja piimatoodete mikrobioloogias, meditsiinilises mikrobioloogias, keskkonnamikrobioloogias, mikroobigeneetikas, kasvusubstraadi arendamises ja biotehnoloogias.
Kõige tavalisem viis elujõuliste bakterite loendamiseks on kasutada agarisöötmel kolooniaid moodustavat proovi. Taldrikuloenduse teostamiseks on kaks peamist viisi: laotamisplaadi tehnika ja valamise plaadi tehnika. Teadaoleva koguse proovi võib laotada agarplaadi pinnale või segada agarisse. Seejärel plaati inkubeeritakse ja tekkivad kolooniad loendatakse. Kolooniate arv on seotud mikroorganismide arvuga algses proovis. Elujõuliste arv mõõdab ainult neid rakke, mis on elus ja kasvavad.
Joonis 02: elujõuliste plaatide arv
Kõige tõenäolisem arv (MPN) on alternatiiv plaadiloenduse meetoditele elujõuliste rakkude populatsioonitiheduse hindamiseks. See loendab vedelkultuuris kasvavaid organisme ja on seega valdav alt bakterioloogiline tehnika. See on eriti kasulik organismide madala kontsentratsiooniga, nt. piim, joogivesi.
Membraanfiltreerimise tehnika sobib paremini siis, kui mikroobid on väga lahjed, näiteks linna veevarustuses. Seda tehakse lihts alt teadaoleva koguse vedeliku läbi filtri juhtimise ja toitainekeskkonnas inkubeerimisega. Filtril arenevad kolooniad loendatakse ja bakterite arv proovi milliliitri kohta arvutatakse.
Millised on rakkude koguarvu ja elujõuliste rakkude arvu sarnasused?
- Rakkude üldarv ja elujõuliste rakkude arv on kahte tüüpi mikroobitehnikaid, mis määravad rakkude arvu.
- Need on mikrobioloogialaborites tavaliselt kasutatavad loendusmeetodid.
Mis vahe on rakkude üldarvul ja elujõuliste rakkude arvul?
Rakkude üldarv loetleb proovis kõik elusad ja surnud mikroobirakud. Seevastu elujõuliste rakkude arv loetleb proovis ainult elusrakud. Niisiis, see on peamine erinevus rakkude koguarvu ja elujõuliste rakkude arvu vahel. Rakkude koguarv ei sõltu kolooniate kasvust agariplaatidel, samas kui elujõuliste rakkude arv on kasvupõhine meetod ja see sõltub mikroobide kolooniate kasvust agariplaatidel.
Allpool toodud teabegraafik võtab kokku rakkude koguarvu ja elujõuliste rakkude arvu erinevuse.
Kokkuvõte – rakkude koguarv vs elujõuliste rakkude arv
Rakkude üldarv loetleb nii elusad kui ka surnud mikroobirakud, samas kui elujõuliste rakkude arv loetleb ainult elusrakud. Seega on see peamine erinevus rakkude koguarvu ja elujõuliste rakkude arvu vahel. Samuti on elujõuliste rakkude arv erinev alt rakkude koguarvust kasvupõhine meetod. Veelgi enam, see nõuab plaatide inkubeerimist kuni nähtavate kolooniate saamiseni. Elujõuliste plaatide loendus, MPN ja membraanfiltreerimine on vähesed elujõuliste rakkude arvu mõõtmise meetodid, samas kui otsemikroskoopia ja hemotsütomeetri kasutamine on kaks rakkude koguarvu meetodit.
