Põhiline erinevus sisestus- ja asendusvektorite vahel on see, et sisestusvektoril on võime sisestada mõõduka pikkusega võõr-DNA-d, samas kui asendusvektoril on võime mahutada suuremaid võõr-DNA-sid.
Faagivektorid on kloonimiseks kasutatavad bakteriofaagid. Faagivektoreid on kahte tüüpi; need on insertsioonivektor ja asendusvektor. Samuti koosnevad kõik faagivektorid ebaolulistest geenidest. Need geenid tuleb aga faagidest eemaldada, et hõlbustada uute võõr-DNA insertsioonide teket.
Mis on sisestusvektor?
Esiteks on insertsioonivektor lambda kloonimise vektorite kõige lihtsam vorm. Tegelikult on see faagivektori tüüp, millel on ainulaadne restriktsioonisait, mis on sisestatud vektori genoomi valikulise DNA positsiooni. Lisaks jääb faagi DNA eemaldamata. See faagi DNA mitteeemaldamine vähendab vektorisse kloonitavate insertide (võõra DNA) suurust. Lisaks on need vektorid kasulikud cDNA kloonimisel ja ekspressioonil. GT10, GT11 ja Zap on selle vektori näited.
Joonis 01: Lambda faag
Sisestusvektor koosneb ühest tuvastamiskohast. Selle vektori esmane ülesanne on arendada eukarüootsetest mRNA järjestustest tuletatud cDNA raamatukogusid. Veelgi enam, see suudab vastu võtta ainult 05–11 kb pikkuseid võõr-DNA-sid. Lisaks on sellel ainulaadne lõhustamiskoht võõra DNA sisestamiseks.
Mis on asendusvektorid?
Asendusvektor või asendusvektor on faagivektori tüüp, mis on välja töötatud faagi DNA keskmise "täitefragmendi" piirkonna eemaldamisel. Soovitud võõr-DNA insert asendab faagi DNA.
Joonis 02: Asendusvektor
Asendusvektorid on olulised genoomsete raamatukogude (nt EMBL4 ja Charon40) loomisel. Need vektorid võivad mahutada suurema pikkusega võõr-DNA-d vahemikus 08-24 kb. Täitepiirkond koosneb ka geenist, mis muudab faagivektori bakteriaalses peremeesorganismis elujõuliseks.
Millised on sisestus- ja asendusvektorite sarnasused?
- Sisestus- ja asendusvektorid on faagivektorid.
- Mõlemad vektorid mahutavad võõr-DNA inserte.
- Need mõlemad on abiks DNA raamatukogude loomisel.
Mis vahe on sisestus- ja asendusvektoritel?
Sisestamine vs asendusvektorid |
|
| Sisestusvektor on faagivektori tüüp, mille restriktsioonisait on sisestatud faagi genoomi valikulise DNA kohta. | Asendusvektor on faagivektori tüüp, mis on välja töötatud faagi DNA keskmise "täitefragmendi" piirkonna eemaldamisel |
| Sisestatavate fragmentide suurus | |
| 05–11 kb pikkus | 08–24 kb pikkus |
| Filler Fragment | |
| Täitefragment puudub | Täitefragment asendatakse võõrsõnaga |
| Funktsioon | |
| CDNA teekide loomiseks on oluline | Genoomiraamatukogude loomisel oluline |
| Näited | |
| GT10, GT11 ja Zap on näited | EMBL4 ja Charon40 on näited |
| Cleage Site | |
| Ainulaadne dekoltee sait on olemas | Lõhustumiskoht sisaldab geene, mis pole lüütilise tsükli jaoks olulised |
Kokkuvõte – sisestamine vs asendusvektorid
Nii sisestus- kui ka asendusvektorid on kahte tüüpi faagivektoreid. Mõlemal vektoril on restriktsioonisaidid, mis hõlbustavad uute võõr-DNA insertide sisseviimist. Sisestusvektorid on olulised cDNA raamatukogude loomisel, asendusvektorid aga genoomsete raamatukogude loomisel. Lisaks mahutavad insertsioonivektorid mõõduka pikkusega DNA inserte. Kuid asendusvektorid võivad mahutada suurema pikkusega võõr-DNA inserte. Üldiselt on see peamine erinevus sisestus- ja asendusvektorite vahel.
