Põhiline erinevus immunosadestamise ja kaasimmunosadestamise vahel seisneb selles, et immunosadestamine on meetod, mis sadestab valgu lahusest välja spetsiifilise antikeha abil, samas kui koimmunosadestamine on meetod, mille käigus sadestatakse spetsiifilist antikeha kasutades lahusest terved valgukompleksid.
Antigeen-antikeha interaktsioon on spetsiifiline keemiline interaktsioon B-rakkude poolt toodetud antikehade ja antigeenide (valkude) vahel immuunreaktsiooni käigus. Tavaliselt ühinevad lahustuvad antigeenid lahustuvate antikehadega lahustuva temperatuuri ja pH juures elektrolüüdi juuresolekul, et moodustada lahustumatu nähtav kompleks. Seda nimetatakse sadestumise reaktsiooniks. Seetõttu on immunosadestamine ja koimmunosadestamine kahte tüüpi sadestamisreaktsioone, mida laborites kasutatakse rutiinselt valkude, näiteks antigeenide tuvastamiseks.
Mis on immunosadestamine?
Immunosadestamine on meetod valgu sadestamiseks lahusest, kasutades spetsiifilist antikeha. Mõnikord nimetatakse seda tehnikat ka individuaalse valgu immunosadestamiseks. Immunosadestamine kasutab rakulüsaadist valitud huvipakkuva valgu eraldamiseks antikeha. Antikeha puhastab segust oma spetsiifilise sihtvalgu või antigeeni. Antikeha seondub valguga ja antikeha-antigeeni kompleks tõmmatakse proovist välja. Eksperimentaalses seadistuses tõmmatakse antigeen-antikeha kompleks välja, kasutades A/G-valguga seotud agaroosi või magnethelmeid. Hiljem helmed pestakse ja huvipakkuv valk elueeritakse. Immunosadestamise teel saadud puhastatud valku või antigeeni kontrollitakse mitmesuguste meetoditega, nagu ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs (ELISA) ja Western blot (WB).
Joonis 01: Immuunsadestamine
Lisaks saab eraldatud valke või antigeene kvantifitseerida ja identifitseerida massispektromeetria abil, kasutades primaarsel järjestusel põhinevaid ensümaatilisi seedimismustreid. Enne immunosadestamise katse alustamist tuleb arvestada teatud kaalutlustega: meetodi vormingu valik, valkude ja helmeste sidumine, õige primaarse antikeha ja isotüübi valimine ning negatiivne kontroll.
Mis on koimmunosadestamine?
Koimmunosadestamine on intaktsete valgukomplekside lahusest väljasadestamise meetod, kasutades spetsiifilist antikeha. Koimmunosadestamine toimib üldiselt spetsiifilise antikeha valimisega, mis on suunatud teadaoleva valgu (antigeeni) vastu, mis arvatakse olevat suurema valkude kompleksi liige. Teadaoleva liikme sihtimisel spetsiifilise antikehaga on võimalik kogu valgukompleks lahusest välja tõmmata. See võimaldab tuvastada kompleksi tundmatuid liikmeid. Valgukomplekside lahusest väljatõmbamise kontseptsiooni nimetatakse mõnikord "alla tõmbamise" mehhanismiks.
Joonis 02: B Koosimmunosadestamine
Koimmunosadestamine on võimas tehnika, mida kasutatakse valgu-valgu interaktsioonide analüüsimiseks. Koimmunosadestamise peamine eesmärk on huvipakkuva valgu interakteeruvate partnerite, nagu ligandid, kofaktorid või signaalmolekulid, tuvastamine. Lisaks on koimmunosadestamine tõhus meetod, mida kasutatakse valkude eraldamiseks seerumist, rakulüsaadist, homogeniseeritud koest või konditsioneeritud söötmest.
Millised on immunosadestamise ja koimmunosadestamise sarnasused?
- Immunosadestamine ja kaasimmunosadestamine on kahte tüüpi sadestamisreaktsioonidel põhinevaid tehnikaid.
- Mõlemat tehnikat saab kasutada sihtantigeeni tuvastamiseks spetsiifilise antikeha kaudu.
- Mõlemad tehnikad sõltuvad tugev alt antigeeni-antikeha interaktsioonist.
- Neid kasutatakse kliinilistes laborites rutiinselt.
Mis vahe on immuunsadesel ja koimmunosadesel?
Immunosadestamine on meetod, mis sadestab valgu lahusest välja, kasutades spetsiifilist antikeha, samas kui kaasimmunosadestamine on meetod, mis sadestab intaktsed valgukompleksid lahusest välja spetsiifilist antikeha kasutades. Seega on see peamine erinevus immunosadestamise ja koimmunosadestamise vahel. Lisaks kasutatakse laborites sagedamini immunosadestamist, samas kui koimmunosadestamist laborites tavaliselt ei kasutata.
Allpool olev infograafik esitab tabelina kõrvuti võrdlemiseks erinevusi immunosadestamise ja koimmunosadestamise vahel.
Kokkuvõte – immunosadestamine vs koimmunosadestamine
Immunosadestamine ja kaasimmunosadestamine on kahte tüüpi sadestamisreaktsioonidel põhinevaid tehnikaid, mis sõltuvad antigeeni ja antikeha interaktsioonist. Immunosadestamise meetod sadestab valgu lahusest välja, kasutades spetsiifilist antikeha, samas kui koimmunosadestamise tehnika sadestab lahusest välja intaktsed valgukompleksid, kasutades spetsiifilist antikeha. Niisiis, see võtab kokku erinevuse immunosadestamise ja koimmunosadestamise vahel.
