Põhierinevus – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaasid on nukleaasid, mis lagundavad spetsiifiliselt RNA väiksemateks ühikuteks. Need võib jagada kahte kategooriasse; endoribonukleaasid ja eksoribonukleaasid. Endoribonukleaas on endonukleaas, mis võib lagundada ühe- või kaheahelalist RNA-d. See lõhustab fosfodiestersidemeid RNA polünukleotiidahelas. Näited on RNaas A, RNaas III, RNaas T1, RNaas P ja RNaas H. Eksoribonukleaas on eksonukleaas, mis lagundab RNA-d, eemaldades RNA molekuli 5'- või 3'otsast terminaalsed nukleotiidid. Näited on RNaas R, RNaas II, RNaas D ja RNaas PH. Peamine erinevus RNASE A ja RNASE H vahel on see, et RNaas A on pankrease ribonukleaas, mis lagundab spetsiifiliselt üheahelalise RNA väiksemateks komponentideks, samas kui RNaas H on mittespetsiifiline ensüüm, mis lõhustab RNA-DNA hübriidis oleva RNA väiksemateks ühikuteks. hüdrolüütiline mehhanism.
Mis on RNASE A?
RNaas A on pankrease ribonukleaas, mis lõhustab spetsiifiliselt paaritumata tsütosiini ja uratsiili jääke üheahelalise RNA 3' otsas. RNaas H töötab kõrgema soolakontsentratsiooni korral (0,3 M või suurem NaCl kontsentratsioon). Hüdrolüütiline reaktsioon koosneb kahest etapist. See moodustab 2', 3' tsüklilise monofosfaadi vaheühendi kaudu 3' fosforüülitud produkti. Kuigi see on spetsiifiline üheahelalisele RNA-le kõrgema soolakontsentratsiooni korral, võib see lagundada ka kaheahelalist RNA-d ja RNA-d RNA-DNA hübriidis madalamal NaCl kontsentratsioonil (alla 0,3 M NaCl).
Bruce Merrifield sünteesis selle ensüümi esmakordselt. RNaas A on molekulaaruuringutes väga populaarne ensüüm. Veiste pankrease RNaas A on RNaasi A näide. See on üks vastupidavamaid ensüüme, mida laboris kasutatakse. See ensüüm ei vaja oma tegevuseks kofaktorit. See on väga termostabiilne ensüüm. RNaas A on esimene ensüüm ja kolmas valk, millel tuvastati õige aminohappejärjestus. See ensüüm on väga väike, sisaldades 124 aminohapet ja molekulmassiga 12600 da. Ja selles on neli histidiini jääki (His 12 ja His 119, mis osalevad katalüütilises reaktsioonis).
Joonis 01: RNaasi A
RNaasi A saab eraldada toorproovi keetmise teel. Keemisel lagundavad kõik teised ensüümid järelejäänud RNaas A. RNaas A on hämmastav alt stabiilne ensüüm. See ensüüm inhibeerib ribonukleaasi inhibiitorvalgu, raskmetallide ja uridiinvanadaadi kompleksidega.
Mis on RNaas H?
RNaas H on mittespetsiifiline ribonukleaasi ensüüm, mis võib hüdrolüütilise reaktsiooni kaudu lagundada RNA-d RNA-DNA hübriidis. RNaas H lõikab RNA-DNA hübriidis RNA 3'-O-P sideme. Lõppkokkuvõttes toodab see 3'OH ja 5' fosfaadiga lõppenud tooteid. DNA replikatsioonis mängib see keskset rolli, eemaldades pärast uute DNA ahelate moodustumist RNA praimeri. Laboratoorsetes tingimustes lagundab see spetsiifiliselt RNA-d RNA-DNA hübriidis, kuid mitte DNA-s ja hübridiseerimata RNA-s. Ja seda ensüümi kasutatakse tavaliselt RNA matriitsi hävitamiseks pärast esimese komplementaarse DNA ahela moodustumist cDNA sünteesi käigus.
Joonis 02: RNaas H
RNaasi H kasutatakse ka nukleaasikaitse testides. Seda saab lisada ka polü-A saba eemaldamiseks mRNA-st. RNaas H on võimeline hävitama mittekodeerivat RNA-d raku sees ja väljaspool. Selle valgu aktiivsuse kofaktoritena on vaja metalliioone. RNaasi H ensüümi inhibeerimiseks võib kasutada kelaati (EDTA).
Millised on RNASE A ja RNASE H sarnasused?
- Mõlemad on oma olemuselt valgulised.
- Mõlemad on endoribonukleaas
- Mõlemad võivad RNA-d lagundada.
- Mõlemad teostavad hüdrolüütilisi reaktsioone.
- Molekulaarlaborid kasutavad mõlemat.
Mis vahe on RNASE A ja RNASE H vahel?
RNASE A vs RNASE H |
|
| RNaas A on pankrease ribonukleaas, mis lõhustab kõrgema soolakontsentratsiooni korral spetsiifiliselt üheahelalise RNA paaritute tsütosiini ja uratsiili jääkide 3' otsa. | RNaas H on mittespetsiifiline ribonukleaasi ensüüm, mis võib hüdrolüütilise reaktsiooni kaudu lagundada RNA-d RNA-DNA hübriidis. |
| RNA lõhustumise olemus | |
| RNaas A lõhustab spetsiifiliselt üheahelalise RNA kõrgema soolakontsentratsiooni korral. | RNaas H lõikab RNA-d RNA-DNA hübriidis. |
| Tegevuse kaasfaktorite vajadus | |
| RNaas A ei vaja oma tegevuseks kofaktoreid. | RNaas H vajab oma tegevuseks kofaktoritena metalliioone. |
| Valgu aktiivsuse inhibiitorid | |
| Ribonukleaasi inhibiitorvalgu, raskmetalli ja uridiinvanadaadi kompleksid inhibeerivad RNAse A aktiivsust. | Kelaator (EDTA) inhibeerib RNaasi H aktiivsust. |
| RNA praimeri eemaldamine DNA replikatsioonis | |
| RNaasi A ei kasutata RNA praimeri eemaldamiseks DNA replikatsioonis. | RNaasi H kasutatakse RNA praimeri eemaldamiseks DNA replikatsioonis |
| DNA malli eemaldamine komplementaarse DNA (C-DNA) sünteesis | |
| RNaasi A ei kasutata RNA matriitsi eemaldamiseks komplementaarse DNA (C-DNA) sünteesi ajal. | RNaasi H kasutatakse RNA matriitsi eemaldamiseks komplementaarse DNA (C-DNA) sünteesi ajal. |
| Polü-A-saba eemaldamine oligoks hübridiseeritud mRNA-st (dt) | |
| RNaasi A ei kasutata polü-A saba eemaldamiseks oligoga (dt) hübridiseerunud mRNA-st. | RNaasi H kasutatakse polü-A saba eemaldamiseks oligoga (dt) hübridiseeritud mRNA-st |
Kokkuvõte – RNASE A vs RNASE H
Ribonukleaasid on nukleaasiensüümid, millel on võime RNA-d väiksemateks ühikuteks lõhustada. Neid on kahte tüüpi; endoribonukleaasid ja eksoribonukleaasid. Endoribonukleaas on endonukleaas, millel on võime lagundada ühe- või kaheahelalist RNA-d. Ja see lõikab fosfodiestersideme RNA polünukleotiidahelas. RNaas A ja RNaas H on kaks endoribonukleaasi. RNaas A on pankrease ribonukleaas, mis lõhustab spetsiifiliselt paarituid tsütosiini ja uratsiili jääke üheahelalise RNA 3' otsas kõrgema soolakontsentratsiooni juures. RNaas H on mittespetsiifiline ribonukleaasi ensüüm, mis võib hüdrolüütilise reaktsiooni kaudu lagundada RNA-d RNA-DNA hübriidis. See on erinevus RNaasi A ja RNaasi H vahel.
Laadi alla PDF RNASE A vs RNASE H
Saate alla laadida selle artikli PDF-versiooni ja kasutada seda võrguühenduseta kasutamiseks vastav alt tsitaadi märkusele. Laadige PDF-versioon alla siit. Erinevus RNASE A ja RNASE H vahel
