Põhierinevus isokraatliku ja gradientelueerimise vahel seisneb selles, et isokraatne elueerimine viitab konstantse kontsentratsiooni säilitamisele liikuvas faasis, samas kui gradientelueerimine tähendab muutuva kontsentratsiooni säilitamist liikuvas faasis.
Kromatograafias kasutatakse termineid isokraatne ja gradientelueerimine. Kromatograafilise käitamise ajal kasutame statsionaarset faasi, mis on mitteliikuv aine, koos liikuva faasiga, liikuva ainega. Isokraatne ja gradientelueerimine kirjeldab liikuva faasi omadusi.
Mis on isokraatlik elueerimine?
Isokraatne elueerimine on termin, mida kasutatakse kromatograafias, kui liikuva faasi kontsentratsioon on konstantne. Siin on liikuva faasi kontsentratsioon kogu kromatograafilise protsessi vältel konstantne. Selles protsessis saame kromatogrammis jälgida, et piigi laius suureneb retentsiooniajaga lineaarselt. See toob aga kaasa puuduse – hilise elueerimise hilise elueerimise piigid muutuvad väga tasaseks ja laiaks. Seetõttu on neid laiu tippe raske tippidena ära tunda.
Lisaks ei muutu isokraatsel elueerimisel selektiivsus kolonni mõõtmete järgi. See tähendab, et selektiivsus ei sõltu veeru mõõtmete muutustest. Siin loetakse pikkust ja läbimõõtu kolonni mõõtmeteks. Seetõttu elueeruvad piigid samas järjekorras.
Mis on gradientelueerimine?
Gradientelueerimine on termin, mida kasutatakse kromatograafias, kui siin on liikuva faasi kontsentratsioon erinev. Teisisõnu, liikuva faasi kontsentratsioon ei pea jääma konstantseks. Näiteks HPLC-s kasutatakse tavalises eraldusmeetodis metanooli alguses 10% ja lõpetatakse 90%, suurendades kontsentratsiooni järk-järgult. Liikuval faasil on kaks komponenti: nõrk lahusti ja tugev lahusti. Nõrk lahusti võimaldab lahustunud ainel aeglaselt elueerida, samas kui tugev lahusti põhjustab lahustunud aine kiiret elueerimist. Pöördfaasikromatograafias kasutame nõrga lahustina vett ja tugeva lahustina orgaanilist lahustit.
Joonis 01: HPLC
Lisaks vähendab gradientelueerimise meetod hiljem elueeruvaid komponente, et need kiiremini elueeruksid, andes kromatogrammile kitsa piigi. See meetod parandab ka piigi kuju ja kõrgust. Lisaks muutub gradientelueerimise tehnikas elueerimise järjekord koos kolonni mõõtmete muutumisega.
Mis vahe on isokraatlikul ja gradientelueerimisel?
Kromatograafias kasutatakse termineid isokraatne ja gradientelueerimine. Isokraatne ja gradientelueerimine kirjeldavad liikuva faasi omadusi. Peamine erinevus isokraatliku ja gradientelueerimise vahel on see, et isokraatne elueerimine viitab konstantse kontsentratsiooni säilitamisele liikuvas faasis, samas kui gradientelueerimine viitab muutuva kontsentratsiooni säilitamisele liikuvas faasis.
Isokraatliku elueerimise tehnikas suureneb piigi laius koos retentsiooniajaga lineaarselt. Kuid gradientelueerimise tehnikas vähendatakse hiljem elueeruvate komponentide peetust, nii et elueerimine muutub kiiremaks ja annab kitsad piigid. Peale selle ei sõltu isokraatsel elueerimisel selektiivsus kolonni mõõtmetest, kuid gradientelueerimisel muutub selektiivsus kolonni mõõtmete muutumisel.
Järgmine tabel võtab kokku erinevuse isokraatliku ja gradientelueerimise vahel.
Kokkuvõte – isokraatlik vs gradient-elueerimine
Isokraatne elueerimine ja gradientelueerimine kirjeldavad liikuva faasi omadusi. Peamine erinevus isokraatliku ja gradientelueerimise vahel on see, et isokraatne elueerimine viitab konstantse kontsentratsiooni säilitamisele liikuvas faasis, samas kui gradientelueerimine viitab muutuva kontsentratsiooni säilitamisele liikuvas faasis.
