Transformatsioon vs transfektsioon
Transformatsioon ja transfektsioon on kaks lihtsat tehnikat, mida kasutatakse võõrgeeni sisestamiseks peremeesrakku. Need tehnikad sõltuvad aga hosti- või vektorsüsteemide tüübist.
Mis on rakkude transformatsioon?
Transformatsioon on tehnika, mida kasutatakse geenide viimiseks pärmi- ja bakterirakkudesse. See tehnika põhjustab tavaliselt geenides pärilikke muutusi ja seega on geeni ekspressioon püsiv. Bakterite transformatsiooni tutvustas esmakordselt 1928. aastal Frederick Griffith. Siis 1970. aastate alguses kasutati seda tehnikat E.coli. E. coli transformatsiooni käigus leotatakse rakke jääkülmas CaCl lahuses2 See etapp muudab E. coli rakud pädevaks. Seejärel segatakse pädevad rakud plasmiidse DNA-ga ja inkubeeritakse jääl 20-30 minutit. Seejärel antakse lühike kuumašokk, et võimaldada DNA ülekandmist rakku. Lõpuks asetatakse rakud toitainepuljongisse ja inkubeeritakse plasmiidide moodustamiseks 37 °C juures 60–90 minutit. Kui need etapid on eduk alt lõpule viidud, saab transformeeritud rakud asetada rakkude paljundamiseks sobivale söötmele. Kuna transformatsiooni peetakse ebaefektiivseks tehnikaks, ei tohi seda kloonipankade koostamiseks kasutada.
Mis on rakkude transfektsioon?
Transfektsioon on meetod võõra geeni sisestamiseks tavaliselt imetajarakkudesse. Transfektsiooniks on kaks meetodit; nimelt mööduv transfektsioon ja stabiilne transfektsioon. Mööduva transfektsiooni korral on geeniekspressioon saadaval piiratud aja jooksul; seega põhjustab geeni muutumine ajutist ekspressiooni. See transfektsioonimeetod on lihtne ja kiire; seega saab seda rutiinselt kasutada. Üheks mööduva transfektsiooni puuduseks on suuremahuliste valgusünteesisüsteemide rakendamise raskus.
Stabiilse transfektsiooni käigus integreeritakse sihtgeen peremeesraku genoomi ja seega on geeniekspressioon erinev alt mööduvast transfektsioonist püsiv.
Mis vahe on transformatsioonil ja transfektsioonil?
• Transformatsioon on geeni viimine prokarüootsesse rakku (bakteri- ja pärmseen), samas kui transfektsiooni nimetatakse tavaliselt geeni viimiseks imetajarakku.
• Transformatsiooni tulemuseks on pärilikud muutused geenides, samas kui transfektsioon võib põhjustada kas ajutist ekspressiooni või püsivaid muutusi geenides.
