Põhierinevus pBR322 ja pUC19 vahel on see, et pBR322 on plasmiidvektor, mille pikkus on 4361 aluspaari, samas kui pUC19 on plasmiidvektor, mille pikkus on 2686 aluspaari.
Kloonimisvektor on väike DNA tükk, mida saab organismis stabiilselt säilitada. See on ka väike DNA tükk, millesse saab kloonimise eesmärgil sisestada võõra DNA fragmenti. Vektor sisaldab olulisi omadusi, mis võimaldavad võõr-DNA fragmendi mugavat sisestamist vektoritesse, nagu restriktsioonisaidid, selekteeritav marker, reportergeen ja ekspressioonielement. Kloonimine viidi esm alt läbi, kasutades E.coli. E. coli kloonimisvektorite hulka kuuluvad plasmiidid, bakteriofaagid, kosmiidid ja bakteriaalsed kunstlikud kromosoomid (BAC). Kõige sagedamini kasutatavad vektorid on geneetiliselt muundatud plasmiidid. pBR322 ja pUC19 on kahte tüüpi plasmiidvektorid.
Mis on pBR322?
pBR322 on plasmiidvektor. See on üks esimesi laialdaselt kasutatavaid E. coli kloonimisvektoreid. See vektor loodi esmakordselt 1977. aastal San Francisco California ülikooli Herbert Boyeri laboris. See on ringikujuline kaheahelaline DNA, mille pikkus on 4361 aluspaari.
Joonis 01: pBR322
Sellel plasmiidvektoril on erilised omadused. Tavaliselt on sellel kaks antibiootikumiresistentsuse geeni: geen bla, mis kodeerib ampitsilliiniresistentsust (AmpR) ja geen tetA, mis kodeerib tetratsükliiniresistentsust (TetR) valk. Lisaks sisaldab see pMB1 replikatsiooni alguspunkti. Sellel plasmiidvektoril on ka rop-geen, mis kodeerib plasmiidi koopiaarvu piirajat. Lisaks on sellel vektoril ainulaadsed restriktsioonisaidid enam kui 40 restriktsiooniensüümi jaoks. Neist neljakümnest restriktsioonikohast 11 asuvad TetR geenis. TetR geeni promootoris on restriktsiooniensüümide HindIII ja ClaI jaoks kaks restriktsioonisaiti. Lisaks on geenis AmpR kuus väga olulist restriktsioonisaiti. pBR322 on madala koopiaarvuga kloonimisvektor. See annab ligikaudu 20 plasmiidi koopiat bakteriraku kohta. Vektori molekulmass on 2,83×106 d altonit.
Mis on pUC19?
pUC19 on plasmiidvektor, mis on 2686 aluspaari pikkune. See on üks plasmiidvektorite seeriast, mille on loonud Joachim Messing ja kaastöötajad. Selle plasmiidiseeria varajane töö viidi läbi California ülikoolis. See on ringikujuline kaheahelaline DNA.
Joonis 02: pUC19
See plasmiidvektor sisaldab ka olulisi omadusi. Sellel on β-glaktosidaasi (lacz) geeni N-terminaalne fragment. Sellel on ka mitme kloonimissaidi (MCS) piirkond. See piirkond on jagatud lacz-geeni koodoniteks 6 ja 7. MCS piirkond pakub palju restriktsiooni endonukleaaside restriktsioonisaite. Lisaks β-glaktosidaasi geenile kodeerib pUC19 ka ampitsilliiniresistentsuse geeni (AmpR). Lisaks pärineb replikatsiooni alguspunkt plasmiidist pMB1. Kuigi pUC19 on väikese suurusega, on sellel suur koopiate arv (500–700 koopiat bakteriraku kohta). Selle plasmiidvektori molekulmass on 1,75 × 106 d altonit.
Millised on pBR322 ja pUC19 sarnasused?
- pBR322 ja pUC19 on kahte tüüpi plasmiidvektoreid.
- Need on populaarsed coli kloonimisvektorid.
- Mõlemal plasmiidvektoril on sama plasmiidi pMB1 replikatsiooni alguspunkt.
- Neil vektoritel on mitu piirangusaiti.
- Mõlemal plasmiidvektoril on selektsioonimarkerina ampitsilliiniresistentsuse geen.
Mis vahe on pBR322 ja pUC19 vahel?
pBR322 on plasmiidvektor, mis on 4361 aluspaari pikkune, samas kui pUC19 on plasmiidvektor, mille pikkus on 2686 aluspaari. Seega on see pBR322 ja pUC19 peamine erinevus. Lisaks on pBR322 väikese koopiaarvuga plasmiidvektor, samas kui pUC19 on suure koopiaarvuga plasmiidvektor.
Allpool olev infograafik näitab erinevusi pBR322 ja pUC19 vahel kõrvuti võrdlemiseks tabelina.
Kokkuvõte – pBR322 vs pUC19
E.coli jaoks kõige sagedamini kasutatavad kloonimisvektorid on geneetiliselt muundatud plasmiidid.pBR322 ja pUC19 on kahte tüüpi plasmiidvektorid. pBR322 on plasmiidvektor, mis on 4361 aluspaari pikkune, samas kui pUC19 on plasmiidvektor, mis on 2686 aluspaari pikkune. Niisiis, see on peamine erinevus pBR322 ja pUC19 vahel.
