Põhierinevus Elisa ja Elispoti vahel seisneb selles, et Elisa on ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, mis määrab sekreteeritud signaalvalkude kogukontsentratsiooni, samas kui Elispot on ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, mis tuvastab üksikuid tsütokiine sekreteerivaid rakke.
Elisa ja Elispot on kaks ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi, mida kasutatakse laialdaselt meditsiinis, taimepatoloogias, biotehnoloogias ja erinevates farmaatsiatööstuses. Nende meetodite puhul tuvastatakse valgu analüüt selle vastu suunatud antikeha abil. Elisa on kõige populaarsem laborites kasutatav ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs. Teisest küljest on Elispot ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, mida ei kasutata Elisa asemel, vaid kasutatakse laborites lisaks Elisale.
Mis on Elisa Assay?
Elisa on ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, mis määrab sekreteeritud signaalvalkude kogukontsentratsiooni. See on laialdaselt kasutatav analüütiline biokeemiline test, mida kirjeldasid esmakordselt Engvall ja Perlmann 1971. aastal. See meetod kasutab tahke faasi tüüpi ensüümi immuunanalüüsi, et tuvastada konkreetse valgu olemasolu vedelas proovis, kasutades selle spetsiifilise valgu vastu suunatud antikehi. See analüüs on meditsiinis, taimepatoloogias ja biotehnoloogias sageli kasutatav diagnostikavahend.
ELISA testi mehhanism
Enamikus ELISA testis immobiliseeritakse alguses tundmatu kogus antigeeni tahkele alusele (mikroliitrine plaat). Seejärel kantakse sobiv primaarne antikeha tahkele tugipinnale. See antikeha moodustab antigeeniga kompleksi (antigeen-antikeha kompleks). Antigeeniga seotud primaarset antikeha saab tuvastada sekundaarse antikehaga, mis on seotud ensüümiga biokonjugatsiooni teel. Elisa testi viimases etapis lisatakse ensüümi substraati sisaldav aine. Kui primaarne antikeha seondub antigeeniga korralikult, põhjustab substraat tuvastatava värvimuutuse. Lõppkokkuvõttes määrab see proovis sisalduva antigeeni koguse.
Joonis 01: Elisa erinevad tüübid
Lisaks on Elisale erinevaid lähenemisi, näiteks otsene Elisa ja kaudne Elisa. Praegu kasutatakse erinevaid Elisa teste, et tuvastada inimese patogeene, nagu Mycobacterium tuberculosis, rotaviirus, B-hepatiidi viirus, C-hepatiidi viirus, enterotoksiine tootvad E.coli, HIV ja SARS-CoV-2.
Mis on Elispot Assay?
Elispot on ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, mis tuvastab üksikuid tsütokiine sekreteerivaid rakke. Cecil Czerkinsky kirjeldas ELISpoti esmakordselt 1983. aastal. See on teatud tüüpi analüüs, mis keskendub ühe raku tsütokiini sekretsiooni sageduse kvantitatiivsele mõõtmisele. See klassifitseeritakse ka tehnikaks, mis kasutab bioloogilise või keemilise valguanalüüdi tuvastamiseks antikehi. Fluorospot test on Elispoti testi variatsioon, mis kasutab fluorestsentsi, et analüüsida mitut analüüti (rohkem salajasi valke).
Elispoti testi mehhanism
Selle mehhanismi korral lisatakse mikroliitriste plaatide süvenditesse esialgu tsütokiinispetsiifilised monoklonaalsed antikehad. Seejärel lisatakse süvenditesse soovitud vaadeldavad rakud. Hiljem rakke inkubeeritakse. Rakkude inkubeerimise ajal lastakse rakkudel reageerida mis tahes stiimulitele ja eritada tsütokiini. Inkubeeritud rakkude poolt sekreteeritud tsütokiinid kinnituvad antikehadele, kuna rakud on ümbritsetud tsütokiinispetsiifiliste monoklonaalsete antikehadega.
Joonis 02: Elispoti test
Nende tsütokiinispetsiifiliste monoklonaalsete antikehade tuvastamiseks lisatakse süvendisse biotinüülitud spetsiifilised tuvastamisantikehad. Biotinüülitud spetsiifilised tuvastamisantikehad püüavad süvendites kinni tsütokiinispetsiifilised monoklonaalsed antikehad. Lisaks lisatakse süvenditesse streptavidiini-ensüümi konjugaate, et seostuda tuvastatavate antikehadega. Viimases etapis lisatakse süvenditesse spetsiifilised substraadid. Ensüümkonjugaatide ja substraatide reaktsioonid tekitavad süvendites selged laigud. Neid erinevaid kohti loetakse automatiseeritud ELISpoti lugejas. Lõppkokkuvõttes arvutab see veelgi tsütokiini sekretsiooni sageduse.
Millised on Elisa ja Elispoti sarnasused?
- Need mõlemad on ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsid.
- Mõlemad testid tuvastavad spetsiifilisi valguanalüüte.
- Need testid kasutavad valgu analüütide tuvastamiseks spetsiifilisi antikehi.
- Mõlemad testid kasutavad ensüüme ja substraate.
- Neid kasutatakse meditsiinilaborites diagnostikavahendina.
Mis vahe on Elisal ja Elispotil?
Elisa on ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, mis määrab sekreteeritud signaalvalkude kogukontsentratsiooni. Teisest küljest on Elispot ensüümiga seotud immunosorbentanalüüs, mis mõõdab üksikuid tsütokiini sekreteerivaid rakke. Niisiis, see on peamine erinevus Elisa ja Elispoti vahel. Veelgi enam, Elisa testis immobiliseeritakse antigeen esm alt mikroliitristesse süvenditesse. Seevastu Elispoti testis immobiliseeritakse antikeha esm alt mikroliitristesse süvenditesse. Seega on see veel üks erinevus Elisa ja Elispoti vahel.
Allpool olev infograafik esitab tabelina üksikasjaliku analüüsi Elisa ja Elispoti erinevuste kohta.
Kokkuvõte – Elisa vs Elispot
Elisa ja Elispot on kaks ensüümiga seotud immunosorbentanalüüsi, mida kasutatakse laialdaselt meditsiinis, taimepatoloogias, biotehnoloogias ja erinevates farmaatsiatööstuses. Elisa tuvastab ligandi (valgu) olemasolu vedelas proovis, kasutades mõõdetava ligandi vastu suunatud antikehi. Elispot test on immuunvastuste jälgimiseks laialdaselt kasutatav meetod. See tuvastab antikehade abil üksikud tsütokiini sekreteerivad rakud. See on nii immuunanalüüsi kui ka bioanalüüsi tehnika. Seega on see Elisa ja Elispoti erinevuse kokkuvõte.
