Põhierinevus konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA vahel on see, et konkureeriv ELISA kasutab inhibeerivat antigeeni, samas kui mittekonkureeriv ELISA ei kasuta testi jaoks inhibeerivat antigeeni.
Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA) on immunoloogiline test, mis tuvastab mitmesuguseid sihtmärke, nagu antikehad, antigeenid, valgud ja glükoproteiinid. See on kiire ja lihtne viis teostada. Seetõttu kasutatakse seda sagedamini uuringute ja diagnostika eesmärkidel. ELISA hõlmab ensüümide kasutamist ning antikehade ja antigeenide spetsiifilist sidumist. Reaktsioonide toimumise põhjal on ELISA nelja tüüpi: otsene ELISA, kaudne ELISA, sandwich ELISA ja inhibeerimise ELISA. Otsene, kaudne ja sandwich-ELISA on mittekonkureeriva ELISA tüübid, samas kui inhibeerimis-ELISA on täieliku ELISA tüüp. Selle artikli peamine eesmärk on arutada erinevust konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA vahel.
Mis on konkureeriv ELISA?
Konkurentsivõimeline ELISA mõõdab antigeeni kontsentratsiooni proovis signaalihäirete tuvastamise kaudu. Siin kasutatakse testis inhibiitorantigeeni. Seega on see teatud tüüpi ELISA inhibeerimine. Selle protseduuri ajal konkureerivad proovis olevad antigeenid valitud võrdlusantigeeniga seondumise eest märgistatud antikeha kindla kogusega. Lisaks algab see protseduur proovi inkubeerimisega märgistatud antikeha liigse kogusega. Samuti tuleks võrdlusantigeen eelnev alt katta mitme süvendiga analüüsiplaadile. Seejärel tuleb proovisegu lisada võrdlusantigeeni sisaldavale analüüsiplaadile. Vabad antikehad seostuvad võrdlusantigeeniga sõltuv alt antigeeni kogusest proovis. Seega, kui proovi antigeeni on rohkem, tuvastatakse vähem võrdlusantigeeni. Seega loob see nõrgema signaali.
Joonis 01: ELISA
Seevastu kui proov sisaldab vähem kogust antigeeni, hõivab antikehi üha rohkem võrdlusantigeeni ja annab tugeva signaali. Kuna konkureeriv ELISA annab tugevama signaali, kui proov sisaldab väikeses koguses antigeene, on konkureeriv ELISA väga tundlik analüüs isegi väikese arvu antigeene sisaldavate proovide puhul.
Mõnes konkureerivas ELISA komplektis kasutatakse märgistatud antikeha asemel märgistatud antigeeni. Siin võistlevad märgistatud antigeen ja prooviantigeen primaarse antikehaga seondumise pärast. Samamoodi, kui antigeeni kogus proovis on väike, on märgistatud antigeeni kogus, mis seondub antikehadega, suurem ja loob tugevama signaali.
Mis on mittekonkureeriv ELISA?
Nelja ELISA tüübi hulgast on kolm tüüpi mittekonkureeriv ELISA. Need on otsene ELISA, kaudne ELISA ja sandwich ELISA. Kõik kolm vormingut töötavad ELISA ühise põhimõtte alusel, kuid nende metoodikates on väikesed erinevused.
Otsene ELISA kasutab ensüümiga märgistatud primaarset antikeha. Seetõttu ei vaja see sekundaarset antikeha. Seetõttu on otsene ELISA kiirem kui muud tüüpi ELISA. Primaarne antikeha seondub vahetult plaadil oleva immobiliseeritud sihtmärk-antigeeniga. Seega toimub ensüüm-substraadi reaktsioon, mis annab nähtava signaali.
Joonis 02: võileib ELISA
Erinev alt otsesest ELISA-st kasutab kaudne ELISA märgistamata primaarset antikeha ja ensüümiga märgistatud sekundaarset antikeha. Kui esmane antikeha seondub immobiliseeritud antigeeniga, seondub sekundaarne antikeha esmase antikehaga. Sekundaarses antikehas sisalduv ensüüm reageerib antigeeniga ja annab nähtava signaali. Sandwich ELISA erineb nii otsesest kui kaudsest ELISA-st. Siin on antikeha immobiliseeritud analüüsiplaadi seina külge.
Millised on konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA sarnasused?
- Konkureeriv ja mittekonkureeriv ELISA on kahte tüüpi immunosorbentanalüüsi tehnikaid.
- Need on väga paindlikud ja tundlikud tehnikad.
- Lisaks on nii konkureeriv kui ka mittekonkureeriv ELISA ensüümiga seotud immuunanalüüs.
- Samuti genereerivad mõlemad meetodid signaali ensüümi-substraadi reaktsiooni tõttu.
Mis vahe on konkureerival ja mittekonkureerival ELISA-l?
Konkurentsivõimeline ELISA on ELISA tüüp, mis põhineb piiratud koguse spetsiifilise antikeha jaoks analüütilise antigeeni ja märgistatud antigeeni vahelisel lõpetamisel. Teisest küljest ei eksisteeri mittekonkureerivas ELISA-s huvipakkuva antigeeni ja võrdlusantigeeni vahel sellist konkurentsi. Seega on see peamine erinevus konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA vahel. Sarnaselt on konkureeriv ELISA inhibeeriv ELISA, samas kui mittekonkureeriv ELISA ei ole inhibeeriv ELISA. Seega on see ka erinevus konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA vahel.
Lisaks on konkureeriv ELISA sobivam huvipakkuva antigeeni väikese koguse mõõtmiseks. See on tundlik meetod. Teisest küljest ei sõltu mittekonkureeriv ELISA proovis olevate antigeenide arvust. Seetõttu on see ka erinevus konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA vahel.
Allpool infograafikat selgitatakse võrdlev alt konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA erinevust.
Kokkuvõte – konkureeriv ja mittekonkureeriv ELISA
Konkureeriv ja mittekonkureeriv ELISA on ELISA ehk ensüümiga seotud immunosorbentanalüüside kaks peamist tüüpi. Konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA erinevuse kokkuvõtteks tugineb konkureeriv ELISA huvipakkuva antigeeni ja võrdlusantigeeni vahelisele konkurentsile piiratud hulga antikehade suhtes. Seetõttu nimetatakse konkureerivat ELISA-d ka inhibeerimise ELISA-ks. Teisest küljest ei tugine mittekonkureeriv ELISA sihtantigeenide ja võrdlusantigeenide vahelisele konkurentsile. See kasutab huvipakkuva analüüdi suhtes märgistatud spetsiifilist antikeha liiast. Seega on see peamine erinevus konkureeriva ja mittekonkureeriva ELISA vahel. Otsene ELISA, kaudne ELISA ja sandwich ELISA on kolm peamist mittekonkureeriva ELISA tüüpi.
