Peamine erinevus – otsene vs kaudne ELISA
Ensüümiga seotud immunoanalüüs (ELISA), tuntud ka kui ensüümi immunoanalüüs, on seroloogiline test, mis tuvastab veres antikehi. Seda kasutatakse diagnostilise vahendina, et teha kindlaks, kas patsient on kokku puutunud teatud tüüpi viirusega või mõne muu nakkustekitajaga (antigeeniga) ja kas organism on tootnud infektsioonivastaseid antikehi. ELISA abil saab tuvastada ka varasemaid ja praeguseid infektsioone. Seetõttu kasutavad arstid ELISA-d sageli eelsõeluuringuna enne haiguste süvaanalüüsi. Seda analüüsi saab teha laboris, võttes patsiendilt vereproovi. ELISA testi on kahte tüüpi: otsene ELISA ja kaudne ELISA. Peamine erinevus otsese ja kaudse ELISA vahel on see, et kaudne ELISA on tundlikum ja nõuab sekundaarse antikeha lisamist, samas kui otsene ELISA on vähem tundlik ja kasutab ainult primaarset antikeha.
Mis on Direct ELISA?
ELISA on haigusdiagnostiline test, mida tehakse teatud antigeenide või antikehade esinemise tuvastamiseks veres. Seda tehakse plaadianalüüsina. See kasutab antikehi, mis on seotud kergesti analüüsitavate ensüümidega. Antigeenide olemasolu seerumiproovis seostub spetsiifiliste antikehadega, mis on seotud ensüümidega. Viimases etapis lisatakse ensüümiga reageerimiseks spetsiifiline substraat. Ensüüm muudab substraadi värviliseks või signaali tootvaks tooteks. Keemilise substraadi värvimuutus näitab konkreetse antikeha olemasolu seerumiproovis. Otseses ELISA testis kasutatakse ainult ensüümiga seotud primaarset antikeha. Antigeeniga seondumisel muudab see kiiresti värvi, mis näitab nakkustekitaja olemasolu veres. Siiski on signaalide intensiivsus otseses ELISA-s nõrgem, kuna epitoobid piirduvad antigeenide seondumisega. Seega on otsene ELISA vähem tundlik kui kaudne ELISA.
Joonis 01: Otsene ELISA test
Mis on kaudne ELISA?
ELISA saab läbi viia, kasutades kahte tüüpi antikehi, nimelt; primaarne ja sekundaarne antikeha. Kaudne ELISA tööriist kasutab mõlemat tüüpi antikehi, et võimendada signaale paremaks tuvastamiseks. Kaudne ELISA meetod viiakse läbi järgmiselt.
- Plaade inkubeeritakse antigeenidega ja pestakse, et blokeerida mittespetsiifiline seondumine.
- Seejärel lisatakse primaarsed antikehad ja pestakse.
- Ensüümiga seotud sekundaarne antikeha lisatakse ja pestakse.
- Lisatakse substraat ja lastakse ensüümidega reageerida.
- Signaalid tuvastatakse ja spetsiifilise antigeeni olemasolu või puudumine proovis tuvastatakse.
Kaudses ELISA testis võivad mitmed sekundaarsed antikehad seonduda ühe primaarse antikehaga. Sekundaarsed antikehad on seotud kergesti analüüsitavate ensüümidega. Seetõttu võib üks sidumine anda tugeva signaali mitme interaktsiooni tõttu. Seega on kaudne ELISA tundlikum kui otsene ELISA. Kaudne ELISA võib aga anda mittespetsiifilisi signaale sekundaarsete antikehade ristreaktsioonide tõttu.
Joonis 02: Kaudne ELISA test
Mis vahe on otsesel ja kaudsel ELISA-l?
Otsene vs kaudne ELISA |
|
| Otsene ELISA on vähem tundlik kui kaudne ELISA. | Kaudne ELISA on tundlikum. |
| Võetud aeg | |
| Otsene ELISA test on kiire protsess. | Kaudne ELISA on aeganõudev. |
| Antikehade kasutamine | |
| Otseses ELISA-s kasutatakse ainult ühte tüüpi antikehi (primaarseid antikehi). | Kaudse ELISA jaoks kasutatakse primaarseid ja sekundaarseid antikehi. |
| Link ensüümidega | |
| Primaarsed antikehad on seotud ensüümidega. | Sekundaarsed antikehad on seotud ensüümidega. |
| Teiste antikehade ristreaktiivsus | |
| Otsene ELISA välistab teiste antikehade ristreaktiivsuse. | Kaudset ELISA-d mõjutavad teiste antikehade ristreaktiivsus. |
| Signaalid | |
| Signaalid on nõrgad võrreldes kaudse ELISA-ga. | Signaale võimendatakse kaudse ELISA abil. Seetõttu on seda lihtne tuvastada. |
Kokkuvõte – otsene vs kaudne ELISA
ELISA on biokeemiline meetod, mida kasutatakse peamiselt immunoloogias, et tuvastada patsiendi vereproovis antikeha või antigeeni olemasolu. Seda saab läbi viia kahe protsessi kaudu, mida nimetatakse otseseks või kaudseks ELISA-ks. Otsene ELISA test kasutab antigeeni tuvastamiseks ainult primaarseid antikehi, samas kui kaudne ELISA kasutab nii primaarseid kui ka sekundaarseid antikehi. Otseses ELISA-s märgistatakse primaarsed antikehad, samas kui kaudses ELISA-s märgistatakse sekundaarsed antikehad. See on vahe otsese ja kaudse ELISA vahel.
