Peamine erinevus – Grami plekk vs happekindel
Bakterid on väga väikesed mikroorganismid. Need on läbipaistvad ja nende tuvastamine elu- ja värvimata tingimustes on keeruline. Seega töötatakse bakterite tuvastamise hõlbustamiseks välja erinevaid värvimismeetodeid. Värvimistehnikaid on kolme peamist tüüpi: lihtne värvimine, diferentsiaalvärvimine ja struktuurvärvimine. Diferentsiaalvärvimine on meetod, mis kasutab bakterite eristamiseks rohkem kui ühte peitsi. Grami peitsi ja happekindlat peitsi tuntakse enim diferentsiaalplekkidena. Gramvärvimine on diferentsiaalvärvimise tehnika, mis jagab bakterid kahte rühma, mida nimetatakse grampositiivseteks ja gramnegatiivseteks bakteriteks. Happekindel peits on diferentsiaalvärv, mida kasutatakse happekindlate organismide (nt Mycobacterium) tuvastamiseks mittehappekindlatest organismidest. See on peamine erinevus Grami peitsi ja happekindla peitsi vahel.
Mis on Gram Stain?
Grammivärvimine on oluline diferentsiaalvärvimise tehnika, mida kasutatakse bakterite tuvastamiseks mikrobioloogias. Selle tehnika võttis kasutusele Taani bakterioloog Hans Christian Gram 1884. aastal. Gramvärvimine jagab bakterid kahte suurde rühma, mida nimetatakse grampositiivseteks ja gramnegatiivseteks, mis on bakterite klassifitseerimisel ja tuvastamisel väga olulised. Mikrobioloogid viivad oma uuringute käigus bakterite iseloomustamise esimese etapina läbi grammiga värvimist.
Bakterid on rühmitatud nende rakuseina erinevuste alusel. Grampositiivsed bakterid koosnevad nende rakuseina paksust peptidoglükaani kihist, gramnegatiivsed aga õhukesest peptidoglükaani kihist nende rakuseinas. Gramiga värvimise tulemus põhineb rakuseina peptidoglükaani kihi paksuse erinevusel.
Grammi värvimine viiakse läbi nelja erineva reaktiiviga, nimelt; esmane peits, peits, värvieemaldusaine ja vastuplekk. Kristallviolet ja safraniini kasutatakse vastav alt primaarse ja vastuvärvina, grammi joodi ja 95% alkoholi kasutatakse peitsina ja värvieemaldajana. Grammi värvimise põhietapid on järgmised;
- Puhtale slaidile valmistatakse bakterite äige, see fikseeritakse kuumusega ja jahutatakse.
- Smear ujutatakse 1–2 minutiks üle kristallvioletiga.
- Liigsete plekkide eemaldamiseks loputatakse määrdeainet aeglaselt voolava kraaniveega.
- Mägule kantakse 1 minutiks grammi joodi.
- Mäde loputatakse aeglaselt voolava kraaniveega
- Smear pestakse 95% alkoholiga 2–5 sekundit ja loputatakse aeglaselt voolava kraaniveega.
- Mädist värvitakse safraniiniga 1 minut
- Määrd loputatakse aeglaselt voolava kraaniveega, kuivatatakse ja vaadeldakse mikroskoobi all.
Gramplekimise lõpus on gramnegatiivsed bakterid roosad, grampositiivsed bakterid aga lillad.
Joonis 01: gramnegatiivsed ja grampositiivsed bakterid
Grammi värvimise tulemuse määrab nende rakuseina peptidoglükaani kihi paksus. Värvusetustamise etapis eemaldatakse esmane plekk ja peits gramnegatiivsetelt bakteritelt kergesti ja muutuvad värvituks, kuna neil on õhuke peptidoglükaanikiht. Esmane plekk säilib grampositiivsetes bakterites, kuna neil on paks peptidoglükaanikiht. Vastuvärv ei ole grampositiivsete bakterite puhul efektiivne, kuna primaarne plekk jääb kinni. Seega on grampositiivsed bakterid nähtavad esmase plekivärvi, st lilla värviga. Vastuplekk määrib gramnegatiivsed bakterid ja need on nähtavad safraniini värviga. Seetõttu on grammi värvimise järgi lihtne baktereid kahte rühma liigitada ning see on väärtuslik bakterite eristamisel ja tuvastamisel.
Mis on happekindel?
Happekindlus on teatud bakterite füüsiline omadus, täpsem alt nende vastupidavus hapete poolt värvimuutusele värvimisprotseduuride ajal. Pärast värvimist peavad need organismid vastu lahjendatud happe- ja/või etanoolipõhistele värvitustamisprotseduuridele, mis on levinud paljudes värvimisprotokollides. Seega on nendele organismidele antud nimi "happekiire". See omadus ilmneb seetõttu, et nende rakuseintes on kõrge vahaja materjali (mükoolhapete) sisaldus. See test on Mycobacterium tuberculosis'e tuvastamisel ülioluline.
Joonis 2: happekindlad mükobakterid
Selle happekindla peitsi töötas välja Paul Ehrlich aastal 1882. Ehrlichi happekindlat meetodit muutis Ziehl-Neelsen ja seda kasutatakse nüüd sagedamini. Happekiire värvimise protseduur hõlmab kolme erinevat reaktiivi. Peamise peitsina kasutatakse karboolfuschini. Värvieemaldusainena kasutatakse happelist alkoholi. Vastupeitsina kasutatakse metüleensinist. Värvimisprotseduur viiakse läbi järgmiselt.
- Esmane plekk (karboolfuksiin) kantakse slaidil olevale fikseeritud proovile (kõik rakud värvitakse punase värviga).
- Slaidi kuumutatakse aurutades 5 minutit, mis ajab plekid korralikult rakkudesse.
- Seejärel lisatakse värvieemalduslahus (see eemaldab punase värvaine kõikidest rakkudest, välja arvatud happekindlad bakterid).
- Metüleensinist lisatakse vastuvärvina (see värvib kõik värvitu bakterirakud).
- Happekindlad bakterid jäävad punaseks, mittehappekindlad aga siniseks.
Millised on sarnasused Grami peitsi ja happekindla vahel?
- Gram-värvimine ja happekindel on kaks erinevat värvimistehnikat.
- Mõlemad tehnikad liigitavad bakterid kahte rühma.
- Mõlema tehnika puhul kasutatakse kahte plekki ja ühte värvieemaldust.
Mis vahe on Grami peitsi ja happekindlal?
Gram plekk vs happekindel |
|
| Gramvärvimine on diferentsiaalvärvimise tehnika, mis jagab bakterid kahte rühma: grampositiivsed bakterid ja gramnegatiivsed bakterid. | Happekindel peits on diferentsiaalvärv, mida kasutatakse happekindlate organismide tuvastamiseks mittehappekindlatest organismidest. |
| Esmane plekk | |
| Kristallviolett on grammiga värvimisel tavaliselt kasutatav esmane plekk. | Karboolfuksiin on peamine plekk, mida kasutatakse happekindlaks. |
| Värvieemaldusaine | |
| 95% alkoholi kasutatakse grammide plekkide värvieemaldusainena. | Happelist alkoholi kasutatakse happepüsivuses värvieemaldusainena. |
| Counter Stain | |
| Gram-peitsi puhul kasutatakse vastupeitsina safraniini. | Happekindlas peitsis kasutatakse vastupeitsina metüleensinist. |
| Vaatlus | |
| Gramnegatiivseid baktereid vaadeldakse värvilise värvusega ja grampositiivseid baktereid lilla värvusega. | Happekindlaid baktereid täheldatakse punase värvusega ja mittehappekindlaid baktereid sinise värviga. |
Kokkuvõte – Grami plekk vs happekindel
Elusas olekus mikroorganismide visualiseerimine on keeruline. Seetõttu kasutatakse nende omaduste uurimiseks laialdaselt bioloogilisi plekke ja värvimisprotseduure. Diferentsiaalvärvimine on ühte tüüpi värvimistehnikat, mida kasutatakse bakterite eristamiseks. Grami peits ja happekindel peits on kaks erinevat värvimistehnikat. Gramvärvimine eristab gramnegatiivseid ja grampositiivseid baktereid nende rakuseinte paksuse alusel. Happekiire värvimine eristab rakuseina mükoolhappe sisalduse alusel happekindlaid baktereid mittehappekindlatest bakteritest. See on erinevus happekindla ja grammi pleki vahel.
Laadi alla PDF-versioon Gram Stain vs Acid Fast
Saate alla laadida selle artikli PDF-versiooni ja kasutada seda võrguühenduseta kasutamiseks vastav alt tsitaadi märkusele. Palun laadige PDF-versioon alla siit. Gram Stain ja Acid Fast erinevus.
