Põhierinevus – CFU vs MPN
Kolooniaid moodustav üksus (CFU) ja kõige tõenäolisem arv (MPN) on kaks meetodit, mida kasutatakse proovides mikroorganismide loendamiseks. Mõlemat parameetrit kasutatakse veekvaliteedi ja väljaheite indikaatorbakterite tuvastamiseks veeproovides. Kolooniaid moodustav ühik on mõõt, mida kasutatakse elujõuliste bakterirakkude või seenerakkude arvu loendamiseks antud proovi konkreetses mahus või massis. Selle parameetri standardühik on CFU/ml või CFU/g. Kõige tõenäolisem arv on teine ühik, mida kasutatakse elujõuliste bakterirakkude arvu mõõtmiseks vedelas proovis. Peamine erinevus CFU ja MPN vahel on see, et CFU arvutatakse tahkel agarplaadil kasvavate bakteri- ja seente kolooniate põhjal, samas kui MPN arvutatakse vedelas keskkonnas kasvavate elujõuliste bakterite põhjal.
Mis on CFU?
Colony forming unit (CFU) on parameeter, mis mõõdab elujõuliste bakteri- või seenrakkude arvu antud proovis. Meetodit, mis loeb kolooniaid moodustavaid ühikuid, nimetatakse standardseks plaatide arvuks. Agarplaatidele ilmuvad elujõulised kolooniad on väljendatud CFU-na 1 ml proovi kohta (kolooniaid moodustav ühik milliliitri kohta) vedelike puhul või CFU-na 1 g proovi kohta (kolooniaid moodustav ühik ühe grammi kohta) tahkete ainete puhul.
CFU mõõtmiseks proovis kasutatakse kahte levinud meetodit. Need on laotatud plaadi meetod ja valada plaadi meetod. Neid kahte meetodit toetab meetod, mida nimetatakse jadalahjendamiseks. Seeriaviisiliselt lahjendatud proovid võimaldavad saada agari pinnale loendatava arvu kolooniaid. Teadaoleva koguse proovi võib laotada agarplaadi pinnale või segada agariga ja valada plaadile. Seejärel plaati inkubeeritakse ja tekkivad kolooniad loendatakse. Kolooniate arv on seotud mikroorganismide arvuga algses proovis. Plaadid, millel on liiga palju või liiga vähe kolooniaid, jäetakse loendamisest välja, kuna nende plaatide tulemused ei pruugi statistiliselt täpsed. Statistiliselt on parim vahemik 30–300 kolooniat agariplaadil. Seetõttu tuleks täpseks loendamiseks valida õiged plaadid. Ül altoodud funktsiooni jaoks tehakse seerialahjendus.
Kui loendate elujõuliste kolooniate arvu plaatidel, saab CFU/ml arvutada järgmise võrrandi abil.
CFU algproovi ml kohta=kolooniate arv plaadil X lahjendustegur
Lahjendustegur=(1/ plaadi lahjendus)
Näiteks kui saate 10-4 lahjenduse plaadile 149 kolooniat, saab bakterite arvu algproovi 1 ml-s arvutada järgmiselt.:
CFU/ml=(149) x (1/10-4)
=149 × 104 või 1490000
=1. 49 x 106
Joonis 01: Kolooniaid moodustav üksus
Mis on MPN?
Kõige tõenäolisem arv on CFU/ml alternatiivne mõõt. MPN hindab ka elujõulisi rakke vedelas proovis. See loeb vedelas kultuuris kasvavaid organisme ja on valdav alt bakterioloogiline tehnika. See meetod on eriti kasulik proovide puhul, mis sisaldavad väikeses kontsentratsioonis bakterirakke; näiteks piim, joogivesi jne. MPN väärtus on väljendatud 100 ml mahu kohta. MPN tugineb tõenäosusteoorial põhinevale statistilisele meetodile. MPN väärtuste leidmiseks 100 ml proovi kohta on olemas statistilised tabelid. Need tabelid näitavad tulemusi 95% usalduspiiridel.
MPN väärtus arvutatakse pärast mitme toruga fermentatsioonimeetodiks nimetatava tehnika läbiviimist. Kolm komplekti sobivat söödet sisaldavaid katseklaase inokuleeritakse kolme erineva proovimahuga, näiteks 10 ml, 1 ml ja 0.1 ml ja inkubeeriti kasvu jaoks. Pärast inkubatsiooniperioodi hinnatakse tuubidele kasvu olemasolu või puudumise kohta punktid + (positiivne) või – (negatiivne). Seejärel võrreldakse positiivsete ja negatiivsete tulemuste mustrit MPN statistiliste tõenäosuste tabeliga, et hinnata mikroorganismide arvu. Seejärel antakse MPN väärtus 100 ml proovi kohta. MPN-i kasutatakse laialdaselt veeproovides esinevate kolibakterite tuvastamiseks.
Joonis 02: MPN-tabel
Mis vahe on CFU ja MPN vahel?
CFU vs MPN |
|
| CFU on mõõt, mida kasutatakse elujõuliste bakterite või seente kolooniate arvu väljendamiseks antud proovis. | MPN on CFU alternatiivne meede ja mõõdab elujõuliste bakterirakkude arvu vedelas proovis. |
| Ühik | |
| CFU/ml või CFU/g | MPN/100 ml |
| Arvutamine | |
| CFU arvutatakse agarplaatidel kasvanud kolooniate arvu loendamisel. | MPN arvutatakse torude positiivsete ja negatiivsete mustrite võrdlemisel MPN statistilise tabeliga. |
| Serial Dilution Technique | |
| Enne proovide agarplaatidele asetamist tehakse seerialahjendus. | MPN arvutamisel seerialahjendust tavaliselt ei tehta |
| Meetodid | |
| Laotusplaadi meetod ja valamise plaadi meetod on kahte tüüpi meetodid, mida kasutatakse CFU saamiseks. | Mitme toruga kääritamine on meetod, mida kasutatakse MPN-väärtuse saamiseks. |
Kokkuvõte – CFU vs MPN
Mikroobide kasvu mõõtmine on vajalik mitmel põhjusel. Toidukäitlemisettevõtetes on vaja mõõta toidus leiduvate mikroorganismide taset ja tüüpi. Toiduainetööstuses ja meditsiinis on vaja tagada steriliseerimisprotseduuride tõhus rakendamine. Reoveepuhastites on vaja regulaarselt mõõta mikroobide arvu. Protseduuri optimeerimisel molekulaarbioloogias on vaja mõõta kolooniate arvu plaatidel. Seetõttu on saadaval erinevad loendus- ja kasvumõõtmismeetodid. CFU ja MPN on kaks sellist meetodit, mida kasutatakse laialdaselt erinevates valdkondades. CFU on antud proovis olevate elujõuliste bakterite ja seente kolooniate arvu mõõt. See arvutatakse standardse plaadiloenduse meetodi või elujõulise plaadiloenduse meetodi abil. MPN on veel üks mõõt, mis väljendab vedelikuproovi antud mahus olevate bakterirakkude arvu. See arvutatakse mitme toruga fermentatsioonimeetodi ja MPN-tabeli abil. See on erinevus CFU ja MPN vahel.
Laadi alla CFU vs MPN PDF-versioon
Saate alla laadida selle artikli PDF-versiooni ja kasutada seda võrguühenduseta kasutamiseks vastav alt tsitaadi märkustele. Laadige PDF-versioon alla siit. Erinevus CFU ja MPN vahel.
