Põhiline erinevus kolorimeetrilise ja fluoromeetrilise analüüsi vahel on see, et kolorimeetriline test määrab värviliste ühendite kontsentratsiooni lahuses, fluoromeetriline analüüs aga lahuse kineetilise mehhanismi.
Biokeemiline analüüs on meetod, mis tuvastab või kvantifitseerib bioloogilise molekuli või aine aktiivsust analüütiliselt. See on in vitro protsess. Kolorimeetriline analüüs ja fluoromeetriline analüüs on kahte tüüpi tavalisi laborites läbiviidavaid biokeemilisi analüüse. Mitmed meetodid, nagu ELISA ja Western blot analüüsid, on samuti keerulised biokeemilised testid metaboolse aktiivsuse kvantifitseerimiseks ja biomolekulide, nagu valkude, ensüümide ja muude väikeste molekulide funktsionaalse käitumise mõõtmiseks. Seda tüüpi teste kasutatakse valgu-DNA, valgu-RNA ja valgu-valgu interaktsioonide tuvastamiseks.
Mis on kolorimeetriline analüüs?
Kolimeetriline test on meetod, mis määrab värviliste ühendite kontsentratsiooni lahuses. Teisisõnu, kolorimeetriline test on reaktsioon, mis põhjustab reaktiivide ja analüütide vahelise ensümaatilise või keemilise reaktsiooni tõttu värvimuutust. Kolorimeetrilisi analüüse kasutatakse biokeemias, et testida ensüüme, spetsiifilisi ühendeid, hormoone, antikehi ja muid analüüte. Nad kasutavad kolorimeetreid või spektrofotomeetreid. Kolorimeetrid on instrumendid, mis iseloomustavad värvilisi proove, et anda värviomaduste objektiivne mõõt. Spektrofotomeeter on seade, mis mõõdab valguse intensiivsust sõltuv alt valguse värvist või lainepikkusest.
Joonis 01: Kolorimeetriline test
Kuidas kolorimeetriline analüüs töötab?
Kolimeetrilises testis valmistatakse ette plaat, milles on süvenditesse seotud konkreetne antikeha. Seejärel lisatakse proov. See võib võimaldada proovil seonduda antikehaga. Seejärel lisatakse süvenditesse detekteerimisantikeha ja substraat, et reageerida tuvastamissondiga. Stopplahus lisatakse lõpus enne lugemist. Tühi kaev, mida nimetatakse tühjaks, jäetakse proovita. Kolorimeetrilises analüüsis, mida tumedam on värv, seda suurem on analüüdi kontsentratsioon. Tavaliselt on näidu mõõtmiseks vaja ainult ühte lainepikkust. Kui aga on võrdlusmõõtmine, kasutatakse kahte või enamat lainepikkust.
Mis on fluoromeetriline analüüs?
Fluoromeetriline test on meetod, mis määrab ensüümreaktsioonide kineetilise mehhanismi. Fluoromeetriline analüüs toimub fluorestseeruva produkti moodustumisega mittefluorestseeruvast substraadist või vastupidi. Selles analüüsis kasutatakse ka fluorestsentsresonantsenergia ülekannet (FRET), kus ensümaatiline reaktsioon muudab kahe fluorofoori positsiooni substraadis, muutes seega fluorestsentsi intensiivsust.
Joonis 02: Fluoromeetriline analüüs
Fluoromeetrilised testid on üldiselt palju tundlikumad kui teised testid. Diagnostiliste ensüümide hinnangud patsientide koe-, raku- või vedelikuproovides suurenevad selle suurema tundlikkuse tõttu.
Kuidas fluoromeetriline analüüs töötab?
Fluoromeetrilises testis lisatakse plaadil olevale proovile substraat ja fluorestsentsi vastus võetakse plaadilugeja abil. Siin mõõdetakse iga rakku eraldi. Fluoromeetrilistes analüüsides kasutatakse läbipaistmatuid plaate. See vähendab valguse hajumist. Seda tüüpi analüüsi jaoks on vaja kahte lainepikkust. Üks lainepikkus on ergastuse tuvastamiseks ja teine lainepikkus on emissiooni jaoks.
Millised on kolorimeetrilise ja fluoromeetrilise analüüsi sarnasused?
- Kolorimeetriline analüüs ja fluoromeetriline analüüs on kahte tüüpi biokeemilisi teste.
- Mõlemad testid tehakse meditsiinilise diagnostika eesmärgil.
- Need testid hõlmavad ensümaatilist reaktsiooni.
- Mõlemad testid hõlmavad substraati ja analüüte.
Mis vahe on kolorimeetrilisel ja fluoromeetrilisel analüüsil?
Kolimeetriline test on meetod, mis määrab värviliste ühendite kontsentratsiooni lahuses, fluoromeetriline test aga meetod, mis määrab ensüümreaktsioonide kineetilise mehhanismi. Niisiis, see on peamine erinevus kolorimeetrilise ja fluoromeetrilise analüüsi vahel. Lisaks on fluoromeetrilised testid tundlikumad kui kolorimeetrilised testid; seega on fluoromeetrilistel analüüsidel võimalus tuvastada rohkem analüüte. Seega on see veel üks oluline erinevus kolorimeetrilise ja fluoromeetrilise analüüsi vahel. Lisaks vajavad fluoromeetrilised testid kahte lainepikkust, kolorimeetrilised testid aga ühe lainepikkusega.
Allpool toodud infograafikul on rohkem erinevusi kolorimeetrilise ja fluoromeetrilise analüüsi vahel.
Kokkuvõte – kolorimeetriline vs fluoromeetriline analüüs
Biokeemiline analüüs on analüütiline protsess, mida kasutatakse rakkude metaboolsete reaktsioonide määramiseks ja kvantifitseerimiseks. Kolorimeetriline test ja fluoromeetriline analüüs on kahte tüüpi biokeemilisi analüüse. Kolorimeetriline test on reaktsioon, mis põhjustab reaktiivide ja analüütide vahelise ensümaatilise või keemilise reaktsiooni tõttu värvimuutust, samas kui fluoromeetriline test on meetod, mida kasutatakse ensüümreaktsioonide kineetilise mehhanismi määramiseks. Mõlemad testid sõltuvad ensümaatilisest reaktsioonist, mis hõlmab substraati ja analüüti. Fluoromeetrilised testid on tundlikumad kui kolorimeetrilised testid. Kõige tähtsam on see, et fluoromeetrilised testid nõuavad kahte lainepikkust, samas kui kolorimeetrilisi analüüse saab läbi viia ainult ühe lainepikkusega. Seega võtab see kokku erinevuse kolorimeetrilise ja fluoromeetrilise analüüsi vahel.
