Peamine erinevus BCA ja Bradfordi testi vahel on see, et BCA test on aeganõudev ja vähem täpne, samas kui Bradfordi test on kiire ja täpne.
BCA ja Bradfordi test on kaks valgukontsentratsiooni määramise analüüsimeetodit. Nendel kahel analüüsil on erinevad analüüsi põhimõtted ja nende täpsused.
Mis on BCA test?
BCA test või bitsinhoniinhappe test on biokeemiline analüüs, mis on kasulik valgu üldkontsentratsiooni määramiseks lahuses. Seda meetodit nimetatakse ka Smithi analüüsiks selle leiutaja Paul K. Smithi järgi. See analüütiline meetod näitab sarnasusi Lowry valguanalüüsi, Bradfordi valguanalüüsi või biureedi reagendiga. Proteiini üldkontsentratsiooni antud proovis saame jälgida proovilahuse värvimuutuse kaudu, mis muutub rohelisest lillaks. See värvimuutus toimub proportsionaalselt valgusisaldusega. Seejärel saame kasutada kolorimeetrilist tehnikat, et analüüsida värvi intensiivsust ja valgusisaldust proovis.
BCA valgusisalduse hindamise meetod
Arvestades BCA analüüsi mehhanismi, sisaldab tüüpiline BCA lahus tugev alt aluselist lahust, mille pH on ligikaudu 11,25, ning selle lahuse koostisainete hulka kuuluvad bitsinhoniinhape, naatriumkarbonaat, naatriumvesinikkarbonaat, naatriumtartraat ja vask(II)sulfaatpentahüdraat. See analüüs sõltub peamiselt kahest keemilisest reaktsioonist: vase(II) redutseerimine vaseks(I) valkude peptiidsidemetega ja kahe bitsinhoniinhappe molekuli kelaatimine vask(I) iooniga, mille tulemuseks on lilla värvi kompleks, mis võib neelavad valgust lainepikkusel 562 nm. Esimeses reaktsioonis on peptiidsidemetega redutseeritud vase(II) kogus võrdeline valgu kogusega proovis.
Mis on Bradford Assay?
Bradfordi test on spektroskoopiline analüütiline meetod, mis on kasulik valgu kontsentratsiooni mõõtmiseks lahuses. Selle meetodi töötas välja Marion M. Bradford 1976. aastal ning see on suhteliselt kiire ja täpne meetod.
Valgu ja Bradfordi reagendi värvireaktsioon
Seda meetodit saame kasutada proovis sisalduva valgu kontsentratsiooni määramiseks. Selle analüüsi käigus proovis toimuv keemiline reaktsioon sõltub ainult proovis sisalduva valgu aminohappelisest koostisest.
Bradfordi valgusisalduse hindamise meetod
Selle testi meetodi puhul on tegemist kolorimeetrilise valguanalüüsiga, mis põhineb Coomassie Brilliant Blue G-250 nimelise värvaine neeldumise nihkel. Üldiselt on see värvaine kolmel kujul: anioonne (sinine), neutraalne (roheline) ja katioonne (punane). Seetõttu muudab värvaine happelistes tingimustes oma värvi punasest siniseks. Selle põhjuseks on valgu seondumine värvainega. Kui aga värvainega seonduvat valku pole, siis värvimuutust ei ilmne, lahus saab punakaspruuni värvi. See värvaine on võimeline moodustama tugeva, mittekovalentse kompleksi valgu karboksüülrühmaga Van der Waali jõudude ja elektrostaatiliste külgetõmbejõu kaudu.
Mis vahe on BCA ja Bradfordi analüüsi vahel?
BCA ja Bradfordi test on kaks valgukontsentratsiooni määramise analüüsimeetodit. Nendel kahel analüüsil on erinevad analüüsi põhimõtted ja erinevused nende täpsuses. Peamine erinevus BCA ja Bradfordi testi vahel on see, et BCA test on aeganõudev ja vähem täpne, samas kui Bradfordi test on kiire ja täpne.
Järgmine infograafik võtab tabelina kokku erinevused BCA ja Bradfordi testi vahel.
Kokkuvõte – BCA vs Bradford Assay
BCA test või bitsinhoniinhappe test on biokeemiline analüüs, mis on kasulik valgu üldkontsentratsiooni määramiseks lahuses. Bradfordi test on spektroskoopiline analüütiline meetod, mis on kasulik valgu kontsentratsiooni mõõtmiseks lahuses. Peamine erinevus BCA ja Bradfordi testi vahel on see, et BCA on aeganõudev ja vähem täpne, samas kui Bradfordi test on kiire ja täpne.
