Peamine erinevus HEK293 ja HEK293t vahel on see, et HEK293 on immortaliseeritud rakuliin, mis pärineb inimese embrüonaalsest neerust, mis on transfekteeritud inimese 5-tüüpi lõigatud adenoviiruse DNA-ga, samas kui HEK293t on tütarrakuliin, mis on tuletatud algsest HEK293 rakuliinist, mis on transfekteeritud SV40 replikatsiooni alguspunkti kandva plasmiidvektoriga.
Transfektsiooni määratletakse tavaliselt kui protsessi, mille käigus viiakse rakkudesse võõr-DNA ja RNA, et mõjutada nende genotüüpi ja fenotüüpi. Selline võõrnukleiinhapete sissetoomine erinevate bioloogiliste, keemiliste ja füüsikaliste meetodite abil võib muuta raku omadusi. Lõppkokkuvõttes võimaldab see uurida geenifunktsiooni ja valgu ekspressiooni raku kontekstis. HEK293 ja HEK293t on kaks rakuliini, mida on rakubioloogia uuringutes laialdaselt kasutatud juba aastaid, kuna neil on kalduvus transfektsiooniks.
Mis on HEK293?
HEK293 on immortaliseeritud rakuliin, mis pärineb inimese embrüonaalsest neerust, mis on transfekteeritud inimese 5-tüüpi adenoviiruse tüüp 5 DNA-ga, et toota paljusid rekombinantseid valke. Algselt eraldas HEK293 inimese neerurakkudest Hollandi bioloog Alex Van der Eb 1973. aastal. Neid rakke kasvatati naissoost loote koekultuuris. Hiljem transfekteeris nad van der Ebi labori järeldoktorant Frank Graham 5-tüüpi inimese äralõigatud adenoviiruse DNA-ga. Selle rakuliini nimi sai HEK293, kuna see oli Franki 293rd eksperiment.
Joonis 01: HEK293
Adenoviiruse geenide lisamine HEK-raku genoomi võimaldab neil rakkudel väga tõhus alt toota suures koguses rekombinantseid valke. Lisaks sisaldab adenoviirusvektor CMV promootori piirkonda; seega suurendab see seda tõhusust veelgi. Seda rakuliini on kasutatud peremehena geeniekspressiooni uuringutes. Seda rakuliini kasutab ka biotehnoloogiatööstus geeniteraapia jaoks terapeutiliste valkude tootmiseks.
Mis on HEK293t?
HEK293t on tütarrakuliin, mis on tuletatud algsest HEK293 rakuliinist, mis on suure hulga rekombinantsete valkude tootmiseks transfekteeritud SV40 replikatsiooni alguspunkti kandva plasmiidvektoriga. HEK293t on inimese rakuliin, mis ekspresseerib SV40 suure T-antigeeni mutantset versiooni. HEK293t loodi Michele Carlose Stanfordi laboris HEK29E rakuliini stabiilse transfektsiooni teel plasmiidiga, mis kodeerib SV40 suure T antigeeni temperatuuritundlikku mutanti. Algselt nimetati seda 293/tsA1609neo. Selle põhjuseks on asjaolu, et neomütsiiniresistentsuse ja SV40 suure T-antigeeni tsA 1609 alleeli ekspressiooni tekitava rakuliini loomiseks kasutatud transfektsioon.
Joonis 02: HEK293t
Tänu SV40 suure T-antigeeni mutantse versiooni ekspressioonile võivad SV 40 replikatsiooni alguspunktiga transfekteeritud plasmiidid oluliselt suurendada rekombinantse valgu hulka. Seda rakuliini kasutatakse tavaliselt biotehnoloogiatööstuses valkude ekspressiooniks ja rekombinantsete retroviiruste tootmiseks.
Millised on HEK293 ja HEK293t sarnasused?
- HEK293 ja HEK293t on kaks rakuliini, mida on rakubioloogia uuringutes laialdaselt kasutatud, kuna neil on kalduvus transfektsiooniks.
- Mõlemad rakuliinid on saadud laboratoorselt.
- Need rakuliinid võivad oluliselt suurendada rekombinantse valgu tootmist.
- Need saadakse inimese embrüonaalsete neerurakkude transfekteerimise teel plasmiidvektoriga.
Mis vahe on HEK293 ja HEK293t vahel?
HEK293 on immortaliseeritud rakuliin, mis pärineb inimese embrüonaalsest neerust, mis on transfekteeritud inimese 5 tüüpi 5-tüüpi adenoviirusega. Seevastu HEK293t on tütarrakuliin, mis on tuletatud algsest HEK293 rakuliinist, mis on transfekteeritud SV40 replikatsiooni alguspunkti kandva plasmiidvektoriga. Niisiis, see on peamine erinevus HEK293 ja HEK293t vahel. Lisaks ei ekspresseeri HEK293 SV40 suure T-antigeeni mutantset versiooni. Teisest küljest ekspresseerib HEK293t SV40 suure T-antigeeni mutantset versiooni.
Järgmine infograafik loetleb kõrvuti võrdlemiseks tabelina HEK293 ja HEK293t erinevused.
Kokkuvõte – HEK293 vs HEK293t
HEK293 ja HEK293t on kaks rakuliini, mida on laialdaselt kasutatud rakubioloogia uuringutes nende pideva kasvu ja kalduvuse tõttu transfektsiooniks. HEK293 on immortaliseeritud rakuliin, mis on tuletatud inimese embrüonaalsest neerust, mis on transfekteeritud inimese 5-tüüpi kärbitud adenoviirusega, samas kui HEK293t on tütarrakuliin, mis on tuletatud algsest HEK293 rakuliinist, mis on transfekteeritud SV40 replikatsiooni alguspunkti kandva plasmiidvektoriga. Seega võtab see kokku HEK293 ja HEK293t erinevuse.
