Peamine erinevus BL21 ja DH5 Alpha vahel on see, et BL21 on proteaasipuudulik geneetiliselt muundatud kompetentne E. coli rakk, mida kasutatakse peamiselt valgu ekspressiooniks, samas kui DH5 Alpha on geneetiliselt muundatud pädev E. coli rakk, millel on peamiselt recA1 mutatsioon. plasmiidi transformatsiooniks.
E. coli on üks kuulsamaid rekombinantsete valkude tootmiseks valitud organisme. Sellest on aastate jooksul saanud kõige populaarsem väljendusplatvorm. Seda kasutatakse ka rakutehasena. BL21 ja DH5 Alpha on kaks geneetiliselt muundatud E. coli rakku, mida praegu kasutatakse vastav alt valgu ekspressiooniks ja plasmiidi transformeerimiseks.
Mis on BL21?
BL21 on proteaasipuudulik geneetiliselt muundatud kompetentne E. coli rakk, mida kasutatakse peamiselt valgu ekspressiooniks. E. coli BL21 on bakterirakk, mis pärineb B tüvest. Sellel on Lon proteaasi ja ompT välismembraani proteaasi defektid. Seda kasutatakse tavaliselt rekombinantse valgu ekspressiooniks, kuna see tagab tavaliselt ekspresseeritud valkude stabiilsuse. BL21 on kasulik valgu ekspressiooniks pCold I-IV DNA ja pCold TF DNA abil. Kuid see pädev E. coli rakk ei ole mõeldud valgu ekspressioonisüsteemi jaoks, mis kasutab T7 promootorit, nagu pET süsteem. Selle põhjuseks on see, et BL21 ei ekspresseeri T7 RNA polümeraasi. Lisaks ei soovitata seda kasutada plasmiidi konstrueerimiseks ega valmistamiseks, kuna sellel ei ole recA mutatsiooni.
Joonis 01: BL21
BL21 kirjeldas esmakordselt Studier 1986. aastal pärast erinevaid B-liini modifikatsioone. BL21 rakkudes puudub LON-proteaas, mis lagundab paljusid võõrvalke. Lisaks puudub sellel veel üks geen, mis kodeerib välismembraani proteaasi (OmpT), mille ülesanne on lagundada rakuväliseid valke. Nende valkude puudumine käivitab võõrvalgu eduka tootmise E. coli BL21 rakkudes. Lisaks takistab hsdSB mutatsioon nendes rakkudes võõr-DNA metüülimist ja BL21 rakkude katkemist.
Mis on DH5 Alpha?
DH5 Alpha on geneetiliselt muundatud pädev recA1 mutatsiooniga E. coli rakk, mida kasutatakse peamiselt plasmiidi transformeerimiseks. DH5 Alpha E. coli rakud on geneetiliselt muundatud Ameerika bioloogi Douglas Hanahani poolt, et maksimeerida transformatsiooni efektiivsust. DH5 alfarakul on kolm erinevat mutatsiooni: recA1, endA1 ja lacZΔM15. recA1 on ühepunktiline mutatsioon, mis asendab glütsiin 160 asparagiinhappe jäägiga recA polüpeptiidis. See mutatsioon blokeerib rekombinaaside aktiivsuse ja inaktiveerib homoloogse rekombinatsiooni. endA1 mutatsioon inaktiveerib intratsellulaarse endonukleaasi, mis ei lase sellel sisestatud plasmiidi lagundada.
Joonis 02: DH5 alfa
Lisaks võimaldab lacZΔM15 mutatsioon transformeeritud rakkude sinivalget skriinimist. Need rakud on pädevad rakud. Neid kasutatakse sageli koos k altsiumkloriidi transformatsiooniga soovitud plasmiidi sisestamiseks. Hiljutised uuringud näitasid, et Hanahani meetodiga rakk DH5 Alpha oli plasmiidi transformatsiooniks kõige tõhusam pädev rakk.
Millised on BL21 ja DH5 Alpha sarnasused?
- BL21 ja DH5 Alpha on kaks geneetiliselt muundatud E.coli
- Mõlemad on pädevad rakud.
- Need koosnevad erinevatest mutatsioonidest.
- Mõlemal puudub looduslik elupaik.
- Neid kasutatakse laboratoorsetel eesmärkidel, nagu ekspressiooniuuringud ja kloonimisprotseduurid.
Mis vahe on BL21 ja DH5 Alpha vahel?
BL21 on proteaasipuudulik geneetiliselt muundatud pädev E. coli rakk, mida kasutatakse peamiselt valgu ekspressiooniks. Teisest küljest on DH5 Alpha geneetiliselt muundatud pädev recA1 mutatsiooniga E. coli rakk, mida kasutatakse peamiselt plasmiidi transformeerimiseks. Niisiis, see on peamine erinevus BL21 ja DH5 Alpha vahel. Lisaks ei ole BL21 E. coli rakul recA1 mutatsiooni, samas kui DH5 Alpha E. coli rakul on recA1 mutatsioon.
Järgmine infograafik loetleb tabelina erinevused BL21 ja DH5 Alpha vahel.
Kokkuvõte – BL21 vs DH5 Alpha
E. coli mittepatogeensed tüved on geneetiliselt välja töötatud teadlaste poolt laboratoorsete ekspressiooniuuringute ja kloonimise eesmärgil. BL21 ja DH5 Alpha on kaks geneetiliselt muundatud E. coli rakku. BL21 kasutatakse peamiselt valgu ekspressiooniuuringuteks. Teisest küljest kasutatakse DH5 Alphat peamiselt plasmiidi transformeerimiseks. Seega on see BL21 ja DH5 Alpha erinevuse kokkuvõte.
