Geeni amplifikatsiooni ja geeni kloonimise peamine erinevus seisneb selles, et geeni amplifikatsioon on protsess, mille käigus tehakse polümeraasi ahelreaktsiooni abil palju huvipakkuvast geenist in vitro koopiaid. Kuid geenide kloonimine on protsess, mille käigus tehakse huvipakkuvast geenist palju koopiaid in vivo, luues rekombinantse plasmiidi ja transformeerides selle peremeesbakteriks.
Geen on spetsiifiline DNA fragment, mis kodeerib valku. Organismil on tuhandeid geene. Pealegi on molekulaarbioloogiliste tehnikate abil võimalik korrutada oluliste geenide DNA järjestusi. Geeni amplifikatsioon ja geenide kloonimine on kaks sellist protseduuri. Mõlemad protseduurid toodavad palju huvipakkuva geeni koopiaid. Siiski on geenide amplifikatsiooni ja geenide kloonimise vahel erinevus nende metoodika poolest.
Mis on geenide võimendamine?
Geeni amplifikatsioon on teatud geenist koopiate tegemine polümeraasi ahelreaktsiooni abil. Geeni amplifitseerimiseks tuleks selle konkreetse organismi DNA ekstraheerida, kasutades õiget DNA ekstraheerimisprotokolli. Seejärel tuleks eraldatud kaheahelaline DNA denatureerida, et saada eraldatud üksikud ahelad. Järgmine samm hõlmab PCR-reaktsiooni kasutamist huvipakkuva geeni koopiate tegemiseks. Lisaks sisaldab PCR segu vajalikke praimereid, nukleotiide, DNA polümeraasi ensüümi, matriitsi DNA-d ja muid koostisosi. HRV programmi lõpus toimub huvipakkuva geeni amplifikatsioon.
Joonis 01: Geeni võimendamine
Lisaks on geenide amplifikatsioon esimene samm konkreetse järjestuse tuvastamisel, organismi tuvastamisel, haiguste diagnoosimisel ja geeniraamatukogude koostamisel jne.
Mis on geenide kloonimine?
Geeni kloonimine on geenitehnoloogia meetod geeniraamatukogude või huvipakkuvast geenist paljude koopiate tegemiseks. See protsess hõlmab rekombinantse plasmiidi valmistamist ja rekombinantse plasmiidi transformeerimist peremeesrakuks, eriti bakterirakuks. Kloon on algse organismi või molekuli identne koopia. Geenide kloonimine võib luua tuhandeid geenikloone.
Joonis 02: geenide kloonimine
Kui huvipakkuv geen on tuvastatud, saab selle konkreetse organismi genoomist eraldada, piirates seda spetsiifiliste restriktsiooniensüümidega. Seejärel tuleks geenifragmendi sisestamiseks sama restriktsiooniensüümi kasutades avada plasmiidid (vektorid). Seejärel transformeeritakse rekombinantne plasmiid peremeesbakteriks, kasutades erinevaid meetodeid, näiteks elektroporatsiooni. Mõned rekombinantsed plasmiidid sisenevad peremeesbakteri rakkudesse. Kasutades antibiootikumi, saab transformeeritud baktereid selekteerida, isoleerida ja kasvatada värskes söötmes. Seega aitab see meetod saada miljoneid geenikloone.
Millised on geenide amplifitseerimise ja geenide kloonimise sarnasused?
- Geeni võimendamine ja geenide kloonimine on kaks molekulaarbioloogilist tehnikat.
- Mõlema tehnika puhul korrutatakse konkreetne DNA järjestus või geen miljonites või tuhandetes kordades.
- Lisaks on mõlemad tehnikad paljude teadusvaldkondade jaoks ülim alt olulised.
Mis vahe on geenide võimendamisel ja geenide kloonimisel?
Geeni amplifikatsioon on protsess, mis teeb konkreetsest geenist koopiaid, kasutades in vitro meetodit, mida nimetatakse PCR-iks. Teisest küljest on geenide kloonimine protsess, mille käigus tehakse konkreetsest geenist koopiaid in vivo meetodil, konstrueerides rekombinantseid vektoreid ja paljundades neid elusorganismis. Niisiis, see on peamine erinevus geenide amplifikatsiooni ja geenide kloonimise vahel. Lisaks võtab geenide amplifikatsioon aega vaid paar tundi, samas kui geenide kloonimine võtab mitu päeva. Seetõttu võime seda pidada ka erinevuseks geenide amplifikatsiooni ja geenide kloonimise vahel. Lisaks näitab geenide amplifikatsiooniprotsess vähem vigu, samas kui geenide kloonimise protsess näitab rohkem vigu.
Järgmine infograafik võtab kokku erinevused geenide amplifikatsiooni ja geenide kloonimise vahel.
Kokkuvõte – geenide võimendamine vs geenide kloonimine
Geeni amplifikatsioon on protsess, mille käigus tehakse soovitud geenist koopiaid polümeraasi ahelreaktsiooni abil in vitro tingimustes, samas kui geenide kloonimine on protsess, mille käigus tehakse huvipakkuvast geenist koopiaid, kasutades rekombinantset DNA molekuli ja elusorganismi/peremeesorganismi. bakter. Seega on see põhiline erinevus geenide amplifikatsiooni ja geenide kloonimise vahel.
