Põhierinevus – RPMI vs DMEM
Enamik uuringuid hõlmab loomarakkude kultiveerimist ja seega nõuavad need uuringud loomarakuliinide säilitamist spetsiaalsetes kasvutingimustes. Loomarakkude kultiveerimist teostatakse laialdaselt farmakoloogilistes uuringutes, et tuvastada ravimite metabolismi, haiguste diagnostikas ja vähiuuringutes. Rakukultuuri sööde on loomarakukultuuri oluline aspekt. Dulbecco Modified Eagle Medium (DMEM) ja Roswell Park Memorial Institute Medium (RPMI) on kaks loomarakkude kultiveerimisel kasutatavat söödet. RPMI on sööde, mida kasutatakse laialdaselt imetajarakkude kasvatamiseks suspensioonikultuuris. DMEM on modifitseeritud baassöötme tüüp, mille aminohapete ja vitamiinide kontsentratsioon on kuni neli korda suurem. DMEM-i kasutatakse rakkude kultiveerimiseks adherentsetes kultuurides. Peamine erinevus kahe meedia vahel on meedia kultuuri tüüp. RPMI-d kasutatakse suspensioonkultuuridel, samas kui DMEM-i kasutatakse kleepuvate rakkude kasvatamiseks.
Mis on RPMI?
RPMI või Roswell Park Memorial Institute Mediumile viidatakse ka kui RPMI 1640. Meedia nimetuse tuletas instituut, kus meedia avastati. Seda söödet kasutatakse tavaliselt loomarakukultuuris, eriti imetajarakkude kasvatamiseks. Need töötati algselt välja inimese lümfotsüütide kasvatamiseks.
RPMI sisaldab järgmisi koostisosi.
- Glükoos
- pH indikaator (fenoolpunane)\
- Soolad (naatriumkloriid, naatriumvesinikkarbonaat, dinaatriumfosfaat, kaaliumkloriid, magneesiumsulfaat ja k altsiumnitraat)
- Aminohapped
- Vitamiinid (i-inositool, koliinkloriid, para-aminobensoehape, foolhape, nikotiinamiid, püridoksiinvesinikkloriid, tiamiinvesinikkloriid, k altsiumpantotenaat, biotiin ja riboflaviin, tsüanokobalamiin)
RPMI eripäraks on fosfaadi suurenenud kontsentratsioon söötmes. RPMI-d kasutatakse 5% süsinikdioksiidi atmosfääris. See tagab rakkude kasvuks maksimaalsed ja optimaalsed tingimused. Söötme pH-d hoitakse 8,0 juures vesinikkarbonaadi puhverdussüsteemi abil.
Joonis 01: Rakukultuur Petri tassil
RPMI rakendused rakukultuuris
- Inimese T- ja B-lümfotsüütide, luuüdirakkude ja hübridoomi kasvatamine.
- Kasutatakse inimese neoplastiliste rakkude uurimiseks.
Mis on DMEM?
Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium (DMEM) on muudetud sööde, mida valmistatakse kaubanduslikult. Keskmise pulbri algne tekstuur on kollane. DMEM-is suurendatakse vitamiinide kontsentratsiooni kuni neli korda, suurendades seeläbi söötme toitainete sisaldust.
DMEM-i muudetakse ka rohkemate soolade, nagu raudnitraat, naatriumpüruvaat ja mõned asendamatud aminohapped, nagu seriin ja glütsiin, lisamisega. Samuti muutub glükoosi koostis söötmes. Algne koostis koosneb 1000 mg/l glükoosist, samas kui DMEM-is suurendatakse kontsentratsiooni kuni 4500 mg/l. DMEM nõuab ka seerumi söötme lisamist, kuna see ei ole täielik sööde. Kõige sagedamini täiendatakse DMEM-i veiseloote seerumiga (FBS). FBS pakub kultiveerimisprotsessi jaoks vajalikke valke ja kasvufaktoreid.
Söötme pH muutub naatriumvesinikkarbonaadi lisamisel. Söötme pH enne naatriumvesinikkarbonaadi lisamist on umbes 6,80–7,40, samas kui pH pärast naatriumvesinikkarbonaadi lisamist on vahemikus 7,60–8,20. Söötme säilitustemperatuur on 2–8 0C.
Joonis 02: DMEM
DMEM-i rakendused
- Et uurida polüoomiviiruse naastude moodustamise võimet hiire embrüonaalsetes rakkudes.
- Kontakti inhibeerimise uuringutes.
- Kanarakukultuuride uurimisel ja analüüsimisel.
Millised on RPMI ja DMEM-i sarnasused?
- Loomarakukultuuris kasutatakse nii RPMI-d kui ka DMEM-i.
- Nii RPMI kui ka DMEM söötmed on vedelad koostised.
- Nii RPMI kui ka DMEM söötmed sisaldavad kasvuks vajalikke asendamatuid aminohappeid, vitamiine ja anorgaanilisi sooli.
- Nii RPMI kui ka DMEM-meedium on puudulik. Seetõttu tuleks seerumit lisada.
- Nii RPMI kui ka DMEM kandja kasutavad süsinikuallikana glükoosi.
- Nii RPMI kui ka DMEM söötme pH on kõrgem.
Mis vahe on RPMI ja DMEM vahel?
RPMI vs DMEM |
|
| RPMI on sööde, mida kasutatakse laialdaselt imetajarakkude kasvatamiseks suspensioonkultuuris. | DMEM on modifitseeritud tüüpi basaalkeskkond, millel on suurenenud aminohapete ja vitamiinide kontsentratsioon. |
| Lisafosfaatide olemasolu | |
| Esita RPMI-s. | Puudub DMEM-is. |
| Kasutage | |
|
Kasutatakse rakkude kultiveerimiseks adherentsetes kultuurides. See on harjunud,
|
| Kultuuritüübid | |
| RPMI-d kasutatakse suspensioonikultuuride jaoks. | DMEM-i kasutatakse kultuuride puhul, kus rakud on kleepunud. |
Kokkuvõte – RPMI vs DMEM
Nii RPMI-d kui ka DMEM-i kasutatakse laialdaselt loomarakkude kultiveerimisel, eriti loomarakuliinide, sealhulgas lümfotsüütide in vitro kultiveerimiseks. DMEM on modifitseeritud põhikeskkond, kus toitainete kontsentratsioon on suurenenud. RPMI, mille on välja töötanud Roswell Park Memorial Institute ja see on ka sööde, mida kasutatakse loomarakkude kultiveerimisel, eriti imetajate lümfotsüütide jaoks. Mõlemad kandjad on kaubanduslikult saadaval. See on erinevus RPMI ja DMEM-i vahel.
